[VIP第1年] 指数:3
优化转染条件MOI值对Lentivirus载体转染许旺细胞的影响：以Lentivirus三质粒系统构建病毒载体，在体外对原代大鼠许旺细胞进行转染，研究不同MOI值（***复数）对转染效率的影响32。结果显示，在病毒转染3天后，各不同MOI值的培养孔中开始出现少量荧光反应，第5天时荧光数量明显增多，第7天达到高峰，第9天与第7天变化不明显。从细胞转染效率来看，不同的MOI值效果不同，MOI值为5和10时转染效率较高。这表明在使用Lentivirus载体转染许旺细胞时，优化MOI值可以提高转染效率。同时，未提及该转染过程对细胞死亡的影响，但可以通过进一步的实验，如细胞活性检测等，来确定在提高转染效率的同时对细胞死亡的影响。选择适合的 RNA 转染试剂是一个复杂的过程，需要综合考虑多个因素。吉林厦门转染试剂
脂质体转染是一种常用的将外源基因导入细胞的方法，脂质体大小：脂质体的大小也可能影响转染效率。较小的脂质体可能更容易进入细胞，但可能携带的 DNA 量较少。较大的脂质体可能携带更多的 DNA，但可能更难进入细胞。研究发现，阳离子脂质体的大小与转染效率之间存在一定的关系。随着脂质体尺寸的增加，转染的主要途径可能从网格蛋白介导的内吞作用转变为脂筏介导的内吞作用，同时也可能观察到巨胞饮作用。这种变化可能会影响脂质体在细胞内的运输和释放，从而影响转染效率。山东转染试剂提高 RNA 转染效率是 RNA 研究领域中的重要课题。
考虑多因子转染能力如果实验需要同时转染多个RNA分子或进行共转染实验，那么选择具有多因子转染能力的试剂是重要的。共转染效果：一些转染试剂可以有效地实现多个RNA分子的共转染，而另一些试剂可能在共转染方面效果不佳。在脂质体方法用于modRNA转染各种类型细胞的初步研究中，MessageMax能将modGFP高效转染入多种细胞中，并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位5。选择适合多因子转染的试剂：根据实验需求，选择能够满足多因子转染要求的转染试剂。例如，如果实验需要同时转染多个基因或进行基因编辑实验，那么选择具有多因子转染能力的转染试剂可以提高实验效率。
考虑细胞毒性低细胞毒性的转染试剂对于保持细胞的活性和正常生理功能至关重要。评估细胞活力：可以通过检测细胞的存活率、增殖能力等指标来评估转染试剂的细胞毒性。在研究不同转染试剂对C2C12细胞的转染效率时，通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度，使所有试剂在达到较高转染效率的同时，对细胞生长和活力的影响有限6。在比较不同转染试剂递送siRNA的摄取、敲低效率和毒性情况的研究中，新开发的CALNPRNAi转染试剂转染效率***高于传统转染试剂，同时毒性比较低7。选择温和的试剂：一些转染试剂可能对细胞的毒性较小，例如基于脂质的转染试剂通常比基于病毒的转染试剂更温和。在颅内递送合成mRNA的研究中，使用常用的转染试剂将合成mRNA递送至小鼠大脑，结果表明该模型中合成mRNA可以成功递送至大脑，且没有可测量的毒性8。提高 RNA 转染试剂的转染效率同时降低细胞死亡。
RNA转染试剂在不同细胞类型中的效果存在***差异。以下将详细阐述不同细胞类型对RNA转染试剂效果的具体影响。肾*细胞系786-O和ACHN：微小RNA-1180（miR-1180）转染对肾*细胞系786-O和ACHN生长有影响。实时定量（qRT）-PCR检测显示转染miR-1180后，786-O和ACHN细胞中p21mRNA水平分别上调。Westernblot检测表明p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符，同时细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调。流式细胞术（FCM）结果显示转染miR-1180后，位于G0/G1期的细胞比例明显增大，而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降，表明细胞周期被阻滞在G0/G1期。MTS结果显示转染miR-1180后，两种肾*细胞活力明显降低。集落形成实验显示miR-1180组的集落数数量明显较少，表明细胞增殖能力降低1。HeLa细胞：两种常见的RNA干扰（RNAi）转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin，在使用非靶向siRNAs的模拟转染中，会引起HeLa细胞脂质组的改变。一些脂质对两种可能化学性质不同的转染试剂都有反应，而其他脂质种类只对其中一种试剂有反应。虽然这些脂质组改变的功能影响尚待研究，但实验表明在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要，比较好辅以正交扰动。 作为一般指导原则，建议使用早期传代的细胞以获得良好的转染效率，特别是涉及原代或干细胞的转染。河北DOTAP 转染试剂
deae-葡聚糖是一种化学修饰的葡聚糖类似物。吉林厦门转染试剂
在人类多能干细胞衍生的心肌细胞（HPSC-CMs）中的应用低转染效率是实现HPSC-CMs在疾病建模和心脏修复研究中广泛应用的障碍。通过优化四个基本参数，即血清补充剂、复制和转染之间的时间、试剂与DNA比以及细胞密度，使用Promega的Viafect™转染试剂能够将HPSC-CMs转染至约95%的效率28。尽管活力有所降低，但转染后的HPSC-CMs仍保持了高纯度和结构完整性，确保了至少14天的转染基因持续表达，为心脏相关疾病的研究开辟了新机遇。在C2C12细胞中的应用C2C12细胞在肌肉领域***使用，但它们和原代成肌细胞一样难以转染，影响了下游实验。虽然自2015年以来超过95%的使用C2C12细胞的报告使用了一种金标准转染剂（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通过比较五种商业试剂（Lipofectamine®3000、Viafect™、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12细胞中的转染效率，发现通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度，所有试剂都能达到超过60%的转染效率，且对细胞生长和活力影响有限。这些试剂还能在C2C12细胞中转染后高效生成GFP阳性的肌管，但在转染siRNA和对原代肌肉细胞的转染中表现出较低效率和较高毒性3。吉林厦门转染试剂
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