[VIP第1年] 指数:3
考虑实验目的和应用场景不同的实验目的和应用场景可能需要不同类型的转染试剂。***应用：如果转染试剂用于基因***或药物研发等应用，那么需要选择具有良好生物相容性和安全性的试剂。在安全有效的递送mRNA使用改性PEI基脂质聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作为新型转染试剂，这些试剂具有优异的生物相容性、高效的递送能力和强大的溶酶体逃逸能力，可直接增加mRNA稳定性并促进高效基因翻译，适用于基因***等应用4。基础研究：对于基础研究实验，可能更注重转染效率和实验的可重复性。在不同转染方式用于modRNA转染人脂肪干细胞的初步研究中，比较了不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况，以及在体内促进血管再生的效果，为基础研究提供了参考10。综上所述，选择**适合的RNA转染试剂需要综合考虑转染效率、细胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子转染能力以及实验目的和应用场景等多个因素。在选择转染试剂时，可以参考已有的研究文献，进行预实验以评估不同试剂的性能，并根据实验需求和条件选择**合适的转染试剂。在转染实验中使用对照对于确定所使用的转染试剂和核酸的效果和效率至关重要。山东转染试剂
网格蛋白介导的内吞途径呼吸道合胞病毒（RSV）是导致婴幼儿***的主要病毒病原体。研究表明，网格蛋白介导型内吞途径是目前研究得较为透彻且经典的病毒入胞途径。其中网格蛋白在此途径中的地位很重要。通过针对网格蛋白重链的小干扰RNA（siRNA）抑制网格蛋白的表达，可以有效的抑制RSV***Hela细胞。这提示网格蛋白介导的内吞途径在病毒感染细胞过程中发挥重要作用，同时也暗示了在某些情况下，RNA转染试剂可能利用这一途径进入细胞21。二、小窝蛋白介导的内吞途径在研究非病毒载体用于小干扰RNA（siRNA）递送时发现，将用组氨酸和半胱氨酸修饰的HIV-1Tat肽（mTat）与聚乙烯亚胺（PEI）结合，并与阳离子两亲脂质基试剂INTERFERin（INT）组合成的杂合载体（mTat/PEI/INT）能高效递送siRNA。研究表明，FilipinIII和β-环糊精（小窝蛋白介导的内吞作用抑制剂）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染，而氯丙嗪（网格蛋白介导的内吞作用抑制剂）则不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染。此外，mTat/PEI/INT在4°C时的转染效率明显低于37°C。这些结果表明，mTat/PEI/INT作为一种潜在的有吸引力的非病毒载体用于siRNA递送，其转染过程可能是通过小窝蛋白介导且依赖温度的内吞途径实现的。中国台湾脾转染试剂纳米颗粒，由于其在DNA转运到细胞中的保护能力，在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。
在人类多能干细胞衍生的心肌细胞（HPSC-CMs）中的应用低转染效率是实现HPSC-CMs在疾病建模和心脏修复研究中广泛应用的障碍。通过优化四个基本参数，即血清补充剂、复制和转染之间的时间、试剂与DNA比以及细胞密度，使用Promega的Viafect™转染试剂能够将HPSC-CMs转染至约95%的效率28。尽管活力有所降低，但转染后的HPSC-CMs仍保持了高纯度和结构完整性，确保了至少14天的转染基因持续表达，为心脏相关疾病的研究开辟了新机遇。在C2C12细胞中的应用C2C12细胞在肌肉领域***使用，但它们和原代成肌细胞一样难以转染，影响了下游实验。虽然自2015年以来超过95%的使用C2C12细胞的报告使用了一种金标准转染剂（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通过比较五种商业试剂（Lipofectamine®3000、Viafect™、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12细胞中的转染效率，发现通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度，所有试剂都能达到超过60%的转染效率，且对细胞生长和活力影响有限。这些试剂还能在C2C12细胞中转染后高效生成GFP阳性的肌管，但在转染siRNA和对原代肌肉细胞的转染中表现出较低效率和较高毒性3。
在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时，转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验，在28℃，以35mm培养皿铺板，16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%；12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α（PPARα）的EGFP标签载体进行验证，两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率，并对下游脂肪酸去饱和酶2（fads2）基因的转录调控效应进行检测，结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合，以触发I型干扰素（IFN）生产。然而，单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明，Lipofectamine诱导在原始，I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子（IRF）3和IRF7，并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下，转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 脂质颗粒的加入导致内体DNA释放增加。
优化电转方法筛选**适电压和脉冲时间：不同细胞种类电转所需的**适电压和脉冲时间不同。例如，人成纤维细胞电转modRNA的**适电压为440V，**适脉冲时间为30ms；Hela、293T、3T3细胞电转**适电压分别为425V、400V、440V，**适脉冲时间均为30ms；人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞的**适电压分别为840V和860V，**适脉冲时间均为20ms。通过筛选**适电压和脉冲时间，可以提高RNA转染效率，同时证明了电转法转染modRNA进入细胞的可行性，且可同时将两种modRNA导入同一个细胞内6。RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP⁺细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。转染时推荐使用血清减少或无血清培养基包括阳离子转染试剂，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。上海转染试剂代做
deae-葡聚糖是一种化学修饰的葡聚糖类似物。山东转染试剂
准确控制脂质体与核酸的比例是关键。通过实验确定比较好的脂质体 - 核酸复合物比例，一般可以进行梯度实验，从较低比例开始逐步增加，观察转染效率的变化。例如，不同类型的细胞对脂质体和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在转染 HEK293 细胞时，可能 1:3（脂质体：核酸）的比例比较合适，而对于较难转染的原代细胞，可能需要适当增加脂质体的用量。
不同配方的脂质体在转染效率上有差异。根据细胞类型和实验目的选择合适的脂质体试剂。例如，一些脂质体含有特殊的功能成分，如靶向基团可以增强与特定细胞的结合，或者具有促进内吞体逃逸的成分，从而提高转染效率。新型的脂质体制剂不断涌现，如含有可电离阳离子脂质的脂质体，在生理 pH 条件下呈电中性，减少与血清蛋白的相互作用，进入酸性的内体后带正电，更有利于与内体膜融合，释放核酸，在提高转染效率的同时降低细胞毒性。 山东转染试剂
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