[VIP第1年] 指数:3
对于容易转染的贴壁细胞如人胚肾细胞（HEK293）和人宫颈*细胞（HeLa），脂质体转染效率相对较高。这些细胞具有较强的内吞能力，能够有效地摄取脂质体-核酸复合物。例如，在标准的转染条件下，HEK293细胞的转染效率可以达到50%-70%。而对于一些难转染的贴壁细胞，如原代肝细胞和某些神经细胞，其转染效率较低。这是因为它们的细胞膜结构比较复杂，可能存在较厚的糖萼或者紧密的细胞间连接，阻碍了脂质体-核酸复合物的进入。例如，原代肝细胞的转染效率可能只有10%-20%。
一般来说，贴壁细胞对脂质体的耐受性相对较好。但是，在高浓度脂质体转染的情况下，即使是耐受性好的细胞也会受到影响。例如，HeLa细胞在高浓度脂质体转染时，可能会出现细胞膜完整性受损，表现为细胞内乳酸脱氢酶（LDH）释放增加，细胞的代谢活动也会受到一定程度的干扰。对于难转染的贴壁细胞，由于其本身比较脆弱，较低浓度的脂质体也可能产生明显的细胞毒性。比如原代神经细胞，脂质体可能会破坏其精细的神经突起结构，影响细胞的正常生理功能。 Severino et al.进行的研究也指出了阳离子脂质作为基因递送纳米载体的潜在毒性。山东难转细胞转染试剂
核细胞、关节软骨细胞、间充质干细胞（MSCs）：选择两种合成转染试剂（阳离子脂质商业试剂LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亚胺（PEI））以及两种天然衍生转染试剂（多糖壳聚糖（98%脱乙酰化）和透明质酸（20%酰胺化）），用于将siRNA递送到包括髓核细胞、关节软骨细胞和间充质干细胞在内的原代间充质细胞中。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（***DH）作为内源性模型基因，在转染后第3天和第6天评估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，还评估了细胞毒性、DNA含量变化和细胞分化潜能等非特异性影响。在四种转染试剂中，基于商业脂质体的试剂在20nMsiRNA时是**有效的siRNA递送试剂，其次是壳聚糖。使用阳离子脂质体、壳聚糖和PEI转染显示出不同程度的活力和DNA含量下降，这取决于所评估的siRNA剂量和细胞类型，但与***DH敲低无关。一些对DNA含量的影响并不伴随着活力的相应变化。然而，细胞周期抑制或进展的标记基因（如p21和PCNA）的表达变化不能解释DNA含量的变化。有趣的是，发现了***DH活性的非特异性上调，这***于软骨细胞15。肝*细胞HepG2和：比较两种人类细胞模型中两种转染剂，即基于脂质体的Lipofectamine™RNAiMAX和基于聚合物的GenMute™。 山东难转细胞转染试剂PEI的分子量对细胞毒性和基因转移活性有影响。
对细胞周期的影响：在微小RNA-1180转染肾*细胞的实验中，FCM结果显示，转染miR-1180后，位于G0/G1期的细胞比例明显增大，而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降，表明细胞周期被阻滞在G0/G1期1。对转染效率的影响：在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞条件的优化实验中，对转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间进行优化，在荧光倒置显微镜下观察并计算转染效率。结果表明，在转染前细胞融合达到90％以上，质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高，并且在转染后48h转染效果比较好3。在筛选更优的脂质体转染试剂的实验中，分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞，流式分析发现MessageMax的转染效率为（83.33%±3.23%），略高于RNAiMax的（78.77%±6.12%），两者没有统计学差异，但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高，是更高效的modRNA转染试剂8。
RNA 转染试剂的效果受到多种因素的影响，包括细胞类型、转染试剂种类、转染条件等。在实际应用中，需要根据具体的实验需求选择合适的转染试剂和优化转染条件，以提高转染效率并减少对细胞的毒性作用。
二、影响因素的差异细胞接种密度：不同类型的细胞在比较好转染效率下的细胞接种密度不同。例如，宫颈*细胞Hela和Siha的比较好接种密度为每24孔板的每孔1.5×10⁴个细胞1，而研究中Caco-2细胞的比较好接种密度为2×10⁵9。DNA用量：各种细胞所需的DNA用量也存在差异。如PC12细胞转染的比较好DNA用量为2μg3，而Caco-2细胞转染时比较好DNA用量为4μg9。脂质体与DNA的比例：不同细胞类型对应的比较好脂质体与DNA的比例不同。Hela细胞中miRNA与脂质体比例为1:0.5，Siha细胞中为1:0.71；Caco-2细胞转染时比较好脂质体与DNA比例为2.5:19。复合物形成时间和孵育时间：不同细胞类型对脂质体-DNA复合物的形成时间和细胞与复合物的孵育时间要求不同。例如，Hela和Siha细胞未明确提及复合物形成时间和孵育时间，而Caco-2细胞的比较好脂质体-DNA复合物形成时间为30min，细胞与复合物孵育时间为6h9。RNA 转染试剂是一类能够将 RNA 分子导入细胞内的物质作用原理。
准确控制脂质体与核酸的比例是关键。通过实验确定比较好的脂质体 - 核酸复合物比例，一般可以进行梯度实验，从较低比例开始逐步增加，观察转染效率的变化。例如，不同类型的细胞对脂质体和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在转染 HEK293 细胞时，可能 1:3（脂质体：核酸）的比例比较合适，而对于较难转染的原代细胞，可能需要适当增加脂质体的用量。
不同配方的脂质体在转染效率上有差异。根据细胞类型和实验目的选择合适的脂质体试剂。例如，一些脂质体含有特殊的功能成分，如靶向基团可以增强与特定细胞的结合，或者具有促进内吞体逃逸的成分，从而提高转染效率。新型的脂质体制剂不断涌现，如含有可电离阳离子脂质的脂质体，在生理 pH 条件下呈电中性，减少与血清蛋白的相互作用，进入酸性的内体后带正电，更有利于与内体膜融合，释放核酸，在提高转染效率的同时降低细胞毒性。 是由非离子核酸与阳离子脂质体（CLs）表面结合，形成多层脂质-核酸复合物而形成的。安徽深圳转染试剂
提高 RNA 转染试剂的转染效率同时降低细胞死亡。山东难转细胞转染试剂
其他转染试剂：机制概述：例如CALNPRNAi转染试剂，其转染机制可能与传统转染试剂不同。该试剂转染效率***高于传统转染试剂，同时毒性比较低。其具体转染机制可能涉及对RNA的摄取、细胞利用率及细胞毒性的综合作用。在不同细胞类型中的表现：目前文献中未明确提及CALNPRNAi转染试剂在特定细胞类型中的具体表现，但研究表明该试剂为难转染细胞的RNA干扰带来了新的选择7。综上所述，不同RNA转染试剂在不同细胞类型中的转染机制存在差异，这些差异主要表现在与RNA的结合方式、进入细胞的途径以及在细胞内的释放和作用方式等方面。了解这些差异对于选择合适的转染试剂进行特定细胞类型的RNA转染实验具有重要意义。山东难转细胞转染试剂
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