纳米颗粒的主要特性使它们能够用于细胞转染,但似乎找到一种既能改善基因表达又不影响细胞、不对细胞造成损害的比较好技术也至关重要。纳米颗粒参与内皮运输的能力使其能够精心设计**精确的方法,将基因结构靶向到特定的作用位置。来自不同化合物和元素的纳米颗粒的作用方式与转染的非病毒载体相同,这使它们能够通过内吞作用将DNA运输过细胞膜。DNA被包裹起来,很容易从核内体中释放出来,也被核酸酶保护着不被消化。由于有许多不同种类的纳米颗粒,找到**适合转染哺乳动物细胞的纳米颗粒是至关重要的。将纳米颗粒与其他化合物连接成多功能、复杂的运输单元,可以提高穿越细胞膜和细胞内运输的效率。将蛋白质或多肽结合到纳米颗粒上,根据细胞类型的不同,转染效率提高了5到10倍。研究已经确定了阳离子脂质体(CLs)的某些特征,这些特征增强了它们在体内转运核酸的能力。湖南minic转染试剂
纳米颗粒递送药物并发挥功能的能力在很大程度上取决于它们被细胞摄取的机制。以蒲公英汤剂体为例,研究发现亲溶酶体物质能***抑制蒲公英汤剂体进入细胞;巨胞饮抑制剂细胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英汤剂体的胞内摄入,且呈现剂量依赖性,敲减Rac1和PAK1也有效地抑制其进入细胞。这些结果提示蒲公英汤剂体通过内吞进入A549细胞且主要由巨胞饮介导26。同理,RNA转染试剂在某些情况下也可能利用巨胞饮途径进入细胞。电穿孔转染中的内吞途径电穿孔转染是一种用于基因递送的技术,在研究其机制时发现,用冰冷介质处理或在电穿孔转染前使用内吞抑制剂处理三种不同的人类细胞系(HEK293、HCT116和HT29)。结果表明,用冰冷介质、氯丙嗪或染料木黄酮处理会***降低所有三种细胞系的电穿孔转染效率,但阿米洛利处理对电穿孔转染效率影响不***。对于用小干扰RNA(siRNA)处理的细胞,只有敲低网格蛋白重链(CLTC)会导致所有三种细胞系的电穿孔转染效率降低。这些数据表明,网格蛋白介导的内吞作用在电穿孔转染中起着重要作用27。辽宁转染试剂定制南京星叶生物正是利用将核酸封装在纳米级脂质体囊泡中的技术,开发出了Gemate系列转染试剂。
鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂具有重要作用,其具体作用机制主要包括以下几个方面:一、保护RNA免受降解鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物,由于其带正电荷的特性,可以与带负电荷的RNA通过相反电荷驱动耦合23。在生物系统中,RNA很容易被RNase降解,而鱼精蛋白可以与RNA复合,形成稳定的复合物,从而保护RNA免受降解1213。例如,通过将单链RNA(ssRNA)与带正电荷的蛋白鱼精蛋白复合,可以稳定阴离子RNA1213。二、增强细胞穿透性鱼精蛋白不仅可以保护RNA,还能增强RNA的穿透细胞的能力。鱼精蛋白-RNA复合物的形成具有双重功能,一方面保护RNA不被降解,另一方面增强其穿透进入细胞的能力23。这种增强的细胞穿透性可能是由于鱼精蛋白的阳离子性质,使其能够与细胞膜相互作用,促进RNA的进入细胞2。
质子泵抑制剂可以通过基于从一个供体蛋白到受体蛋白的能量转移的物理测量来评估,也可以通过化学测量来评估,在化学测量中,表达的蛋白质与另一种蛋白质之间的相互作用活性可以在刺激时通过适当的报告系统来检测。后一种基于荧光素酶的方法被称为生物发光共振能量转移(BRET),它是荧光共振能量转移研究质子泵抑制剂的替代方法。多个质粒的共转染也可以应用于转染,其中包括将编码Cas9蛋白和引导RNA的质粒递送到宿主细胞,使用CRISPR/Cas9基因组工程系统进行基因组编辑。除了使用多个质粒外,双链载体是另一种将不同基因传递到宿主细胞的方法。双链载体是一种能够表达两种不同基因的载体,通过一个内部核糖体进入位点连接,只有一个启动子。基于病毒的转染,或者更具体地称为转导,涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。
纳米颗粒,由于其在DNA转运到细胞中的保护能力,在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。通过将纳米粒子与许多不同的配体和化合物连接来修饰纳米粒子,有助于改善它们在细胞内的运输。将纳米颗粒靶向到细胞内的特定位置,配子和胚胎,可以通过磁转染来实现。尽管与市售的用于体外培养细胞的转染试剂相比,使用纳米颗粒转染具有相当的效率和更低的细胞毒性,但仍需要证明以这种方式传递DNA会导致体内相似水平的基因表达,特别是考虑到该技术可能导致副作用。纳米颗粒,由于其在DNA转运到细胞中的保护能力,在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。辽宁转染试剂定制
阳离子聚合物是一种非病毒载体。湖南minic转染试剂
阳离子聚合物作为转染试剂结合机制:以阳离子聚合物EZTransCellReagent为例,在优化RNA干扰(RNAi)条件的研究中发现,阳离子聚合物通过与RNA分子结合来实现转染14。例如,设计针对GFP的shRNA,使用EZ转染试剂将其转染到细胞中,shRNA***降低了GFP的表达。预稀释的转染试剂在室温下以及小核酸的存在可增加转染效率,且在24小时时达到峰值。与环状核酸相比,线性核酸与阳离子聚合物结合时显示出更高的转染效率和更高的基因组整合率。作用特点:阳离子聚合物介导的RNAi条件优化后,为未来的RNAi研究提供了有用的数据。湖南minic转染试剂
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