TUNEL染色的染色步骤1. 样品准备:•将组织切片或细胞固定在载玻片上,通常使用4%多聚甲醛或其他固定剂。•进行蛋白酶K处理,以增加细胞膜的通透性,使TdT能够进入细胞并接触DNA。2. TUNEL反应:•准备TUNEL反应混合液,包括TdT酶和标记的dUTP(如荧光素或生物素标记的dUTP)。•将反应混合液滴加到样品上,在适当的温度下孵育一定时间(通常为1小时左右)。3. 洗涤:•用PBS缓冲液或其他适当的洗涤液清洗样品,去除未结合的dUTP。4. 信号检测:•如果使用的是荧光素标记的dUTP,可以直接在荧光显微镜下观察。•如果使用的是生物素标记的dUTP,则需要进一步与链霉亲和素-荧光素复合物或其他显色试剂结合,然后在显微镜下观察。油红O染色用于检测脂肪沉积。南京番红-固绿染色
病理染色切片对于诊断各种疾病,如**,具有重要意义。1.冰冻包埋及切片:•基本原理:冰冻切片(frozensection)是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。这种方法能够较好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶的活性以及抗原的免疫活性。•应用:由于冰冻切片的制作过程比石蜡切片快捷、简便,因此多应用于手术中的快速病理诊断。它可以在短时间内提供病理信息,帮助实验人员在实验过程中做出及时的明确的决策。 南京维多利亚蓝染色哪家好Masson三色染色用于区分肌肉、胶原和纤维组织。
病理染色需要注意这些事项:(4)Harris苏木精染液配制的好坏直接影响切片染色质量。好的苏木精染液500ml正常染色能力为2500张左右。为保证染色质量应及时更换染液。(5)苏木精染液要经常过滤以保证染色清洁而不在切片上有染色渣的出现。(6)盐酸乙醇分化液配制参见本书第十二章。分化时间可根据分化液的新旧适当调整,新的分化液时间短些。分化的目的就是让该染上要清晰地染上,而不该着色的一定要分化掉。(7)氨水返蓝液浓度不可过高,返蓝时间不可过高,不要过长,否则会发生脱片现象。
病理染色切片的注意事项(1)石蜡切片放入恒温箱中烤片,温度不可过低或过高,以75℃为宜,否则在染色过程中容易发生脱片。(2)组织切片脱蜡要经二甲苯三次才能彻底。切片从恒温箱取出后应趁热浸入二甲苯以利于彻底脱蜡。使用一段时间后,***缸二甲苯融的蜡较多应倒弃,其后的二甲苯依次前移,***一缸换新鲜的二甲苯。(3)切片经70%乙醇后入苏木精染液前,必须自来水水洗3次,***1次比较好用蒸馏水水洗并控干。这样可以保证Harris苏木精染色能力持久,而不会因为低浓度乙醇的混合而过早的丧失染色能力。病理学家通过染色切片分析组织病变。
组织切片是病理学诊断上面必要的过程,但你以为检体只有做成石蜡包埋切片,然后染H&E染色后诊断一个方法吗?其实在组织病理上还有很多不同的包埋及切片方法,配上各种原理不同的染色法,就可以进行各式各样的组织分析。***,我们整理了常用的组织病理学切片技术及染色方法,供大家对切片技术上有更多的认识~因应各种不同的诊断及实验需求,选择适合的染色,才能取得比较好的结果。????H&E:观察组织「形态」的标准染色方法,是组织学中**重要、**常被使用的化学染色方法。????特殊化学染色:种类繁多,针对各种不同的组织细胞生化特性,有多种不同的染色可以应用。染色技术需要严格的实验室操作规范。南京番红-固绿染色
银染色用于观察神经纤维和细胞外基质。南京番红-固绿染色
3. 普鲁士蓝反应:•用蒸馏水清洗切片后,将其浸入含有亚铁**钾(K₄[Fe(CN)₆])的溶液中,在室温下孵育一段时间(通常是10-20分钟),形成普鲁士蓝沉淀。4. 复染:•为了更好地观察组织结构,通常会进行复染,例如使用苏木精染色(Hematoxylin)。5. 脱水、透明和封片:•用乙醇梯度脱水,然后用二甲苯透明处理,***用中性树胶封片。6. 显微镜观察:•在显微镜下观察染色后的切片,蓝色沉淀表示铁的存在。优点•特异性高:鲁士蓝染色对铁离子具有高度特异性,能够准确地检测和定位铁沉积。•操作简便:染色步骤相对简单,不需要复杂的仪器设备。•结果直观:染色后的铁沉积呈现明显的蓝色,易于观察和分析。南京番红-固绿染色
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