从亲和层析柱上洗脱下的高亲和抗体应该是高亲和抗体,从而可以产生高特异性的胶体金结合物。这些抗体可能需要进一步的处理以避免交叉反应。虽然亲和纯化法耗费大量的时间、经费、血清,但是通过该方法可以获取任何免疫分析必需的关键原料——高质量的结合物。抗原的标记成功制备抗原标记物依靠两个因素:控制抗原与胶体金颗粒联接的三种氨基酸残基的空间位置和抗原大小。大多数的抗原标记物是被使用在快速检测试纸上,例如血清的双抗体夹心法或竞争法检测。在这种情况下,通常选择40nm胶体金颗粒。直到近期,研究人员发现,40nm胶体金颗粒标记的蛋白分子量下限为30KD.然而在某些条件下,通过先进的标记技术可以将该限制降低到一半至15KD.使用这些小颗粒标记的主要限制是被标记蛋白必须包含足够数量的赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸残基。抗原常不含有足够的半胱氨酸残基,以至抗原和胶体金颗粒之间的结合力相对较弱且容易断裂,尤其在样本中存在高亲和力的抗体时。对于分子量低于30KD的抗原,通常采用其他技术方法,例如标记较小的胶体金颗粒,广西胶体金读数仪市场价,广西胶体金读数仪市场价。在检测线处由于胶体金颗粒过小使得可见度低很可能导致灵敏度降低。采用现代光电技术,用光电传感器测量反射光强度,广西胶体金读数仪市场价,定量或定性分析金标试纸颜色深浅,计算被测物含量或浓度。广西胶体金读数仪市场价
免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3~15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究,主要包括:①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体,分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角,区分不同的标记,能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚,溶胶颗粒增大、沉降,光散射随之发生变化,溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离,得到的区带转移至硝酸纤维素膜,与特异性的抗体保温后,再与胶体金标记物温育,根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法,灵敏度可低至0.1ng。5、胶体金在肉眼水平的应用--胶体金免疫结合试验广西胶体金读数仪市场价快速提供检测结果,具有很高的准确性和重复性。
免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术。免疫胶体金技术是一种常用的标记技术,有其独特的优点,具有操作方法简单快速、敏感性高、特异性强、稳定性好、结果准确、易于判定等优点,对于从实验室研究到临床疾病辅助诊断都有一定的作用。
1971年Faulk和Faytor将胶体金引入免疫化学,此后,免疫胶体金技术成为继酶免疫标记、放射性免疫标记和荧光免疫标记三大标记技术之后的又一较为成熟的、并且得到广泛应用的重要技术,且随着单克隆技术的成熟和纳米技术的兴起而逐渐得到完善和发展。
免疫胶体金技术的基本原理:胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。 胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它生物大分子结合,如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金多次应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。
胶体金标记抗体技术:建立于20世纪70年代初,因胶体金液呈樱桃红色,故标记抗体后进行免疫染色,可直接光镜观察。金颗粒的电子密度相当高,电镜下清晰可辨。因此近年来该技术被广泛应用于生物学和医学各领域的电镜研究,自20世纪80年代开始,有取代免疫酶细胞化学电镜技术之趋势。该技术的主要优点:①省时.程序较酶标抗体法简单;②不需H2O2等处理,对组织细胞超微结构保存较好;③金颗粒电子密度高,电镜下容易识别,且易于同其他免疫反应产物区别;④可与酶标抗体或铁蛋白标记抗体等相结合进行双标记染色,研究两种不同抗原在超微结构水平的定位;⑤也可用不同直径的金颗粒标记不同的抗体,研究两种以上抗原的共存;⑥因抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少与抗原的量呈正相关,故可用于组织细胞抗原的半定量分析;⑦将胶体金标记的一抗体直接加入培养液中,利用培养细胞具有吞饮作用的特点,可进行培养细胞内的抗原定位研究;⑧金颗粒具有较强激发电子能力,故也可用于扫描电镜对细胞表面抗原或一些受体的定位观察;⑨胶体金液无毒,对人体亦无损伤。因此,胶体金标记抗体染色技术是目前免疫电镜技术很常用的理想染色方法。内置4G模块,支持远程质控,远程标曲升级等云端通讯。广西胶体金读数仪市场价
分别测试反射率范围为[0.2,0.8]内高、中、低反射率的3条质控条,CV≤3%。广西胶体金读数仪市场价
HCG金标免疫试验:金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体,(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。金标为一种催化剂,经还原剂(如对苯二酸)处理,将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银,沉淀在每个金颗粒的周围,银沉淀在光镜下可清楚地显示。滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验,也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜,再用金标记抗体或抗原进行快速测定。临床应用的有两种方法:金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。广西胶体金读数仪市场价
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