用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的荧光强度,根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值,准确地测定反应体系中被分析物的浓度。TRFIA 所使用的荧光标记物是镧系稀土金属[4],由于镧系稀土金属离子螯合物有很长的荧光寿命(微秒级),有别于传统荧光的短荧光寿命,使其能通过时间分辨方式区别于背景荧光(钠秒级),正是由于荧光衰变时间长,可以延缓测量时间,待测样品中短寿命的本底荧光衰变后再测稀土离子的特异荧光,因此可完全消除本底荧光的干扰。镧系稀土金属离子螯合物荧光很宽的Stokes 位移使其容易通过波长分辨方式进一步区别于背景荧光,提高方法学的稳定性。镧系稀土金属离子螯合物狭窄的荧光发射峰使其荧光检测具有很高的效率,湖南全自动免疫荧光分析仪厂家,进一步提高了信号检测的特异性和灵敏性。此外,由于检测时加入了荧光增强液,湖南全自动免疫荧光分析仪厂家,它可使原来荧光增强100万倍,湖南全自动免疫荧光分析仪厂家,以上各种因素使TRFIA 的检测灵敏度和准确性大幅度提高。全自动免疫荧光分析仪使用专业孵育仓设计,孵育仓数量高达25个。湖南全自动免疫荧光分析仪厂家
解离增强镧系元素荧光免疫分析解离增强镧系元素荧光免疫分析(Dissociation Enhanced Lanthanide FluoroimmunoassayDELFIA)是时间分辨荧光免疫分析中的一种。它用具有双功能基团结构的螯合剂,使其一端与铕(Eu)连接,另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接,形成EU标记的抗体/抗原,经过免疫反应之后生成免疫复合物。由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱,因此加入一种增强剂,使Eu3+从复合物上解离下来,自由Eu3+同增强剂中的另一种螯合剂螯合形成一种胶态分子团,这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光,信号增强了百万倍。因为这种分析方法使用了解离增强步骤,因此称为解离增强镧系元素荧光免疫分析。中国台湾时间分辨荧光分析仪在线议价检测项目:PCT、HIV、CRP、NT-proBNP、MYO等免疫荧光诊断试剂项目。
常见荧光素及其特性
FITC:黄色结晶粉末,吸收光490~495nm,发射光520~530nm,明亮的黄绿色荧光。
RB200:橘红色粉末, 吸收光570nm,发射光595~600nm,橘红色荧光。
TRITC:紫红色粉末,吸收光550nm,发射光620nm,橙红色荧光。
镧系:Eu3+、Tb3+等。
PE:吸收光490~560nm,发射光595nm,红色荧光。
其它:酶作用后产生荧光物质,具体如下表:
酶 底物 产物 激发光 发射光
B-G MUG MU 360 450
AP MUP MU 360 450
HRP HPA 二聚体 317 414
合适荧光素的选择
具有与蛋白质形成共价键的化学基团。
荧光素-N=C +NH-蛋白质 荧光素-N-C-N-蛋白质
‖ ︱ ︱‖ ︱
S H H S H
荧光效率高,标记后下降不明显。
荧光色泽与背景色泽对比鲜明。
标记后能保持生物学活性和免疫活性。
标记方法简单、快速。
安全无毒。
时间分辨荧光分析(TRFIA)是以稀土离子为标记物,特异性荧光为特征的,超灵敏度检测技术,是非放射性标记技术中的佼佼者。它不但灵敏度极高,而且克服了酶标记物的不稳定;化学发光只能一次发光,且易受环境干扰;电化学发光的非直接标记等缺点。是免疫学检测的理想选择。
灵敏度高,测量范围广
原子标记稳定性强,试剂盒有效期一年
对被标记物的生物活性和结构无影响
多标记技术,一个测试,多个项目,减少系统误差
波长分辨
标记离子的荧光激发光波长范围较宽,发射光谱峰范围窄,是类线光谱,有利于降低本底荧光强度,提高分辨率。
激发光和发射光之间有一个较大的Stokes位移,有利于排除特异荧光的干扰,增强测量的特异性。
时间分辨
标记离子螯合物产生的荧光强度高,寿命长,有利于消除样品及环境中荧光物质对检测结果的影响。
每一秒钟检测样品1000次,结果取平均值,有利于提高检测的准确性。 时间分辨荧光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、所用试剂有良好的稳定性、检测限较宽、等优点。
时间分辨荧光免疫测定:以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点,延长荧光测量时间,待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定,所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光,从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。增强液的作用是使荧光信号增强。因为免疫反应完成后,生成的抗原-抗体-铕标记物复合物在弱碱性溶液中,经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2~3,铕离子很容易解离出来,并与增强液中的β-二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物,十分有利于荧光测量。 全自动免疫荧光分析仪样本架采用10管位设计,支持5个样本架同时上样,上样量可达50个。海南台式免疫荧光分析仪参考价格
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荧光法是一种非常有用的工具,各种各样的分析领域都在利用它。由于它具有高灵敏度、好的选择性以及可提供多参数信息(如,荧光强度、荧光寿命、荧光各向异性)等特点,所以被多次用于生物制药研究、临床诊断、宇宙空间环境监测、免疫分析中分子间作用原理研究、DNA序列分析、荧光原位杂交以及细胞成分分析等。镧系系复合物由于其特有的荧光特性而受到关注,特别是在临床生化分析中。利用镧系元素的荧光特性,构建时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂以及创建新的灵敏度高的荧光免疫分析方法(fluoroimmunoassay)是当今临床生化的主要研究方向。湖南全自动免疫荧光分析仪厂家
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