[VIP第1年] 指数:3
胶体金蛋白结合物的质量鉴定（1）胶体金颗粒平均直径的测量：用支持膜的镍网（铜网也可）蘸取金标蛋白试剂，自然干燥后直接在透射电镜下观察。或用醋酸铀复染后观察。计算100个金颗粒的平均直径。（2）胶体金溶液的OD520nm值测定：胶体金颗粒在波长510nm～550nm之间出现*大吸收值峰。用0.02Mol/LpH8.2PBS液（含1％BSA，0.02％NaN3）将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释，OD520＝0.25左右。一般应用液的OD520应为0.2～0.4。（3）金标记蛋白的特异性与敏感性测定：采用微孔滤膜免疫金银染色法（MF－IGSSA）。将可溶性抗原（或抗体）吸附于载体上（滤纸、硝酸纤维膜，陕西多通道胶体金读数仪代理商、微孔滤膜），用胶体金标记的抗体（或抗原）以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体，陕西多通道胶体金读数仪代理商，对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定，陕西多通道胶体金读数仪代理商。测试质控条，相对极差≤5%。陕西多通道胶体金读数仪代理商
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胶体金标记蛋白质影响因素：胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的，胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程，标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果，一般情况下，当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时，胶体金对蛋白质的吸附力强。反之，当胶体金pH值低于蛋白质等电点时，则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白（SPA）时，SPA等电点是pI5.1，胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时，胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品，如多价抗体的标记，实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件，可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析，胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小，金颗粒直径越小，金颗粒所具有的总表面积就越大，可吸附蛋白质的量也就越大。
联接机理：研究人员普遍接受的理论为，三种特异的氨基酸残基在金颗粒与蛋白质的联接作用中发挥着重要的作用。而赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸这三种氨基酸与胶体金联接的作用机理各不相同。1、赖氨酸带有较强的正电荷，因而自然吸附带负电荷的金颗粒；2、色氨酸主要通过疏水相互作用与胶体金相联接；3、半胱氨酸通过SH-与金表面以共用电子的形式形成配位键。抗体通过这几种作用力与胶体金颗粒牢固、稳定的、不易分离的结合在一起。在很大程度上，标记成功与否取决于上述三种氨基酸残基在被标记蛋白质上的结合位点。在某种情况下，氨基酸联接于蛋白质的活性部位，从而干扰蛋白质的反应活性。空间位阻的限制，当这几种氨基酸残基定位于抗体的抗原结合部位或抗原的特异抗体结合决定簇部位时，可能出现这种类型的干扰。如果被标记的蛋白质分子未做特定的处理就几乎不可能克服这种干扰。为了在免疫检测中获得较好的灵敏，这三种与标记相关氨基酸的正确结合是非常重要的。就标记抗体来说，这三种氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应远离抗原的反应决定簇位置。 免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。
胶体金在电镜水平的应用：胶体金应用电镜水平的研究早，发展快，应用多。其优点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记。直径为3～15nm 胶体金均可用作电镜水平的标记物。3～15nm 的胶体金多用于单一抗原颗粒的检测，而直径15nm 多用于检测量较多的*染细胞。胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。单层培养中细胞内抗原的检测。组织抗原的检测。 胶体金在光镜水平的应用：胶体金同样可用做光镜水平的标记物，取代传统的荧光素、酶等。各种细胞涂片、切片均可应用。主要用于：用单克窿抗体或抗血清检测细胞悬液或培养的单层细胞的膜表面抗原。检测培养的单层细胞胞内抗原，组织中或亚薄切片中抗原的检测。 通线方式：USB接口，RS232，网口、WIFI数据传输。陕西多通道胶体金读数仪代理商
通过仪器辨别试纸条颜色变化，能够避免人为判读所造成的主观误差。陕西多通道胶体金读数仪代理商
应用在制备免疫金结合物的特异性抗体的稳定性主要取决于检测试验的技术条件。对于侧向层析分析，比较好的抗体形式是采用一般的单克隆配对。在这类检测分析中，一种单克隆抗体被标记胶体金作为指示剂，而另一种被固定于硝酸纤维素膜上作为捕获剂。每种抗体对于抗原表面的不同反应决定簇都应该是特异识别，并且这些抗原决定簇在空间结构上距离较远。多克隆抗体也可以被使用，但至少是必须经过protein-A柱层析纯化。在多数情况下，抗体经亲和层析纯化后能制备出具有较高灵敏度和特异性的结合物。这当然取决于符合试验检测可接受交叉反应的技术要求。亲和层析纯化硫酸铵沉淀法或DEAE纯化的血清，含有大量的杂蛋白将竞争性结合胶体金颗粒表面的结合位点。这些杂蛋白拥有高含量的控制蛋白与胶体金结合的三种氨基酸残基，很容易与裸露的胶体金颗粒结合。出现这种情况时，检测系统中指示剂的灵敏度水平降低。如果采用经A蛋白或G蛋白柱层析纯化的抗体，然后IgG片段中可能含有大量的非特异性的IgG，而不是需要的特异性IgG.所有的IgG将与胶体金结合，结果可能是低灵敏度。 陕西多通道胶体金读数仪代理商
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