联接机理:研究人员普遍接受的理论为,三种特异的氨基酸残基在金颗粒与蛋白质的联接作用中发挥着重要的作用。而赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸这三种氨基酸与胶体金联接的作用机理各不相同。1、赖氨酸带有较强的正电荷,因而自然吸附带负电荷的金颗粒;2、色氨酸主要通过疏水相互作用与胶体金相联接;3、半胱氨酸通过SH-与金表面以共用电子的形式形成配位键。抗体通过这几种作用力与胶体金颗粒牢固、稳定的、不易分离的结合在一起。在很大程度上,标记成功与否取决于上述三种氨基酸残基在被标记蛋白质上的结合位点。在某种情况下,氨基酸联接于蛋白质的活性部位,从而干扰蛋白质的反应活性。空间位阻的限制,当这几种氨基酸残基定位于抗体的抗原结合部位或抗原的特异抗体结合决定簇部位时,可能出现这种类型的干扰,江苏金标胶体金读数仪零售价格。如果被标记的蛋白质分子未做特定的处理就几乎不可能克服这种干扰。为了在免疫检测中获得较好的灵敏,这三种与标记相关氨基酸的正确结合是非常重要的。就标记抗体来说,江苏金标胶体金读数仪零售价格,这三种氨基酸应定位于Fc区,而对于标记抗原,它们应远离抗原的反应决定簇位置,江苏金标胶体金读数仪零售价格。 免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。江苏金标胶体金读数仪零售价格
金标记方法学特点及质量控制:特异性与ELISA相似,敏感性略低于ELISA。定性检测时单个操作(NC膜条或NC反应块)、检测快速(胶体金本身为红色,不需加发色试剂,阳性反应即出现红色斑点或条带,整个操只需5—30分钟)、操作简便(蘸取或滴加标本、试剂即可)、不需特殊设备(手工)、结果明确(显红色,肉眼观察),且金标记物稳定,冷冻干燥后可在室温长期保存。金标记方法学尤其适合个人保健、床边检测、基层卫生单位检测、急诊检验、新项目小标本量筛查等。 广东金标读数仪代理商通过仪器辨别试纸条颜色变化,能够避免人为判读所造成的主观误差。
胶体金的颜色溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类,是散射光线还是透射光,粒子越小,分散度越高,则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说,粒子大小不同,呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5~20nm之间,吸收波长520nm,呈红色的葡萄酒色;20~40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光,溶液呈深红色;60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光,溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5~60nm范围内,溶液呈现红色。在相当的一段时期内保持其溶胶不变性,称为胶体金的稳定性。影响其稳定性的因素主要是电解质,其次是胶体金本身的浓度、温度及其他非电解质等。
溶胶的聚沉现象胶粒之间存在吸引力与排斥力这对矛盾,在溶胶胶粒带电及溶剂化的情况下,排斥力成为矛盾的主要方面,溶胶稳定而不聚沉。因为某种原因使溶胶粒带电量减到很小,甚至中和其所带电荷并能去溶剂化膜,胶粒之间可在更近的距离互相接近,引力成为主要矛盾,引力超过斥力时胶粒便聚结发生聚沉。引起溶胶聚沉的原因有。(1)少量电解质对溶胶的聚沉作用少量电解质即可使溶胶聚沉,但各种电解质的聚沉能力可用聚沉值来表示。聚沉值是在一定时间内使1L某浓度的溶胶产生聚沉所需电解质的zui小物质的量(mm01)。显然,聚沉值愈小,聚沉能力愈大。聚沉值从实验中得出如下的规则:①电解质负离子对带正电的溶胶起主要聚沉作用,正离子对带负电的溶胶起主要聚沉作用;②同价离子聚沉能力几乎相等,不同价离子的聚沉能力随离子价增加而明显增加。电解质能使溶胶聚沉是由于电解质与胶粒带相反电荷离子的作用,中和了胶粒所带的一部分电荷,使胶粒电量减少,扩散层缩小,溶剂化层变薄,而当双电子层厚度缩至很小和溶剂化层变得很薄时,两个质粒间便可以更加接近,即不产生斥力,两个胶粒间因引力加大而合并的趋势增强,甚至引力占优势以致使胶粒聚结而发生聚沉。快捷的仪器校准方案。
胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存:胶体金具有很高的动力学稳定性,在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢,可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。金溶胶必须有少量电解质作稳定剂,但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚,但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性,如蛋白质、葡萄糖、PEG20000 等的加入有良好的稳定效果。当金溶胶吸附蛋白质后,溶胶的稳定性随溶液pH 而变化,而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点,如ConA ,过氧化物酶等,当pH 较低时保持稳定,提高pH 则显得不稳定,接近等电点或略高时又变得稳定了。标记后的胶体金溶液可用0.2 ~0.5mg/ml PEG20000 作为稳定剂。在4 ~10℃ 贮存数月有效,不宜冰冻。
适用于胶体金免疫层析试纸条样品的检测。江苏金标胶体金读数仪零售价格
测试质控条,相对极差≤5%。江苏金标胶体金读数仪零售价格
标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/LK2CO3调pH至9.0,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH(标记SPA时调到pH6.0)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2~0.5mg/mlPEG20000的缓冲液中,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=1.5左右为宜,以0.5mg/ml叠氮钠防腐,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含0.1%BSA的缓冲溶液洗 通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2,以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0 江苏金标胶体金读数仪零售价格
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