继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)之后,一种固相标记免疫测定技术--免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique, ICG)逐渐发展起来。它是以胶体金作为标记物,利用抗原抗体特异性反应,对抗原或抗体物质进行定性乃至定量研究的标记技术。近年来,该技术因其操作简便、观察直观、灵敏度高、价格低廉等优点在医学、动植物检疫以及食品安全监督等各领域均得到了多方面的应用。胶体金即金的水溶液,是指分散相粒子直径在1-100 nm的金溶胶。由氯化金溶液在还原剂作用下,金离子还原成金原子,浙江金标胶体金读数仪零售价格,浙江金标胶体金读数仪零售价格,从而凝合形成特定大小的金颗粒,因其中正负离子组成胶粒的双电子层结构,浙江金标胶体金读数仪零售价格,从而使溶胶处于稳定状态,故称胶体金。 10.1寸电容大屏,超高分辨率。浙江金标胶体金读数仪零售价格
蛋白质适用量的选择:胶体金与标记蛋白用量之比的确定:根据待标记蛋白的要求,将胶体金调好pH之后,分装10管,每管1ml.将标记蛋白(以IgG为例)以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml~50µg/ml,分别取1ml,加入上列金胶溶液中,混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后,在上述各管中加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。结果观察,对照管(未加蛋白质)和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管,均呈现出由红变蓝的聚沉现象;而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量,即为该标记蛋白质的低用量,在实际工作中,可适当增加10%~20%。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug)加到1ml胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,5分钟后加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10%即为标记蛋白量。 山西胶体金快速检测读数仪零售价格通过仪器辨别试纸条颜色变化,能够避免人为判读所造成的主观误差。
胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、酶、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合,因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。 免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。在反射率范围为[0.2,0.8]的线性范围内,线性相关系数|r|≥0.990。
免疫胶体金技术的基本原理:胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。 胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它生物大分子结合,如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金多次应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。浙江金标胶体金读数仪零售价格
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胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存:胶体金具有很高的动力学稳定性,在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢,可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。金溶胶必须有少量电解质作稳定剂,但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚,但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性,如蛋白质、葡萄糖、PEG20000 等的加入有良好的稳定效果。当金溶胶吸附蛋白质后,溶胶的稳定性随溶液pH 而变化,而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点,如ConA ,过氧化物酶等,当pH 较低时保持稳定,提高pH 则显得不稳定,接近等电点或略高时又变得稳定了。标记后的胶体金溶液可用0.2 ~0.5mg/ml PEG20000 作为稳定剂。在4 ~10℃ 贮存数月有效,不宜冰冻。
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