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免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。3、胶体金的示踪原理金颗粒具有高电子密度的特性。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。免疫金银染色：利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理，通过银颗粒的沉积，在光镜下可见抗原抗体反应的阳性部位呈现银的黑褐色，新疆多通道胶体金读数仪品牌，新疆多通道胶体金读数仪品牌。采用现代光电技术，新疆多通道胶体金读数仪品牌，用光电传感器测量反射光强度，定量或定性分析金标试纸颜色深浅，计算被测物含量或浓度。新疆多通道胶体金读数仪品牌
胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法：根据胶体金颗粒的大小，标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心（20nm金胶粒用1200r/min，5nm金胶粒用1800r/min）20min，弃去凝聚的沉淀。然后将5nm胶体金结合物用6000g，4℃离心1h；20nm～40nm胶体金结合物，14000g，4℃离心1h.仔细吸出上清，沉淀物用含1％BSA的PB液（含0.02％NaN3），将沉淀重悬为原体积的1／10，4℃保存。 如在结合物内加50％甘油可贮存于-18℃保存一年以上。为了得到颗粒均一的免疫金试剂，可将上述初步纯化的结合物再进一步用10％～30％蔗糖或甘油进行密度梯度离心，分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。新疆多通道胶体金读数仪品牌想要购买专业的读数仪，找无锡天纵易骏合作。
应用在制备免疫金结合物的特异性抗体的稳定性主要取决于检测试验的技术条件。对于侧向层析分析，比较好的抗体形式是采用一般的单克隆配对。在这类检测分析中，一种单克隆抗体被标记胶体金作为指示剂，而另一种被固定于硝酸纤维素膜上作为捕获剂。每种抗体对于抗原表面的不同反应决定簇都应该是特异识别，并且这些抗原决定簇在空间结构上距离较远。多克隆抗体也可以被使用，但至少是必须经过protein-A柱层析纯化。在多数情况下，抗体经亲和层析纯化后能制备出具有较高灵敏度和特异性的结合物。这当然取决于符合试验检测可接受交叉反应的技术要求。亲和层析纯化硫酸铵沉淀法或DEAE纯化的血清，含有大量的杂蛋白将竞争性结合胶体金颗粒表面的结合位点。这些杂蛋白拥有高含量的控制蛋白与胶体金结合的三种氨基酸残基，很容易与裸露的胶体金颗粒结合。出现这种情况时，检测系统中指示剂的灵敏度水平降低。如果采用经A蛋白或G蛋白柱层析纯化的抗体，然后IgG片段中可能含有大量的非特异性的IgG，而不是需要的特异性IgG.所有的IgG将与胶体金结合，结果可能是低灵敏度。
胶体金的颜色溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒子越小，分散度越高，则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说，粒子大小不同，呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红色的葡萄酒色；20～40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光，溶液呈深红色；60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光，溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5～60nm范围内，溶液呈现红色。在相当的一段时期内保持其溶胶不变性，称为胶体金的稳定性。影响其稳定性的因素主要是电解质，其次是胶体金本身的浓度、温度及其他非电解质等。读数仪价格靠谱，欢迎咨询无锡天纵易骏了解！
蛋白质适用量的选择：胶体金与标记蛋白用量之比的确定：根据待标记蛋白的要求，将胶体金调好pH之后，分装10管，每管1ml.将标记蛋白（以IgG为例）以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml～50µg/ml，分别取1ml，加入上列金胶溶液中，混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后，在上述各管中加入0.1ml10％NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。结果观察，对照管（未加蛋白质）和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量，即为该标记蛋白质的低用量，在实际工作中，可适当增加10％～20％。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后，分别取0.1ml(含蛋白质5～40ug)加到1ml胶体金溶液中，另设一管不加蛋白质的对照管，５分钟后加入0.1ml10％NaCl溶液，混匀后静置２小时，不稳定的金溶胶将发生聚沉，能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10％即为标记蛋白量。无锡天纵易骏的读数仪物美价优，如您需要，不要犹豫！新疆多通道胶体金读数仪品牌
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金标记方法学特点及质量控制：特异性与ELISA相似，敏感性略低于ELISA。定性检测时单个操作(NC膜条或NC反应块)、检测快速(胶体金本身为红色，不需加发色试剂，阳性反应即出现红色斑点或条带，整个操只需5—30分钟)、操作简便(蘸取或滴加标本、试剂即可)、不需特殊设备(手工)、结果明确(显红色，肉眼观察)，且金标记物稳定，冷冻干燥后可在室温长期保存。金标记方法学尤其适合个人保健、床边检测、基层卫生单位检测、急诊检验、新项目小标本量筛查等。新疆多通道胶体金读数仪品牌
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