常用的免疫胶体金检测技术: (1)免疫胶体金光镜染色法 细胞悬液涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,中国台湾胶体金检测读数仪市场价,以银显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的敏感性。 (2)免疫胶体金电镜染色法 可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测,中国台湾胶体金检测读数仪市场价。 斑点免疫金渗滤法 (3)应用微孔滤膜(如膜)作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。 (4)胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,中国台湾胶体金检测读数仪市场价,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,当移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。无锡天纵易骏为您讲解读数仪 知识。中国台湾胶体金检测读数仪市场价
快速诊断技术(侧向层析和渗滤测试盒)。对于该应用方向,常用的胶体金颗粒是40nm.在标记IgG时,40nm的胶体金颗粒提供较大的可视性和较小的空间位阻。分子量为160kDa的IgG分子,长度大约为8nm.40-100nm间的胶体金颗粒比较顺利标记到IgG抗体上。比40nm大的颗粒有较大的可视性,但较大胶体金颗粒在1ml溶液时520nm吸光度较小,因此较少在检测线处被捕获。综上所述,同40nm或60nm胶体金标记的抗体相比,较大颗粒的胶体金结合物对1-10ng/ml分析物具有较低的灵敏度。60nm胶体金颗粒非推荐使用,但可以应用于快速诊断分析。其不同于40nm胶体金颗粒,颜色偏浅。高质量的40nm胶体金为樱桃红色,而60nm胶体金为深粉红色。在某种情况下,样品类型可使膜上残留背景底色,这种轻微的颜色差异可以使信号容易识别。比如,含有胆红素的样本将留下的背景底色,相对褐色,粉红色较红色容易被识别。如果用于标记分子的分子量小于160kDa,20nm胶体金颗粒更适合。20nm胶体金颗粒通常用于标记链霉亲和素、A蛋白和抗原,这些被标记蛋白的分子量小于60kda.灵敏度随着快速诊断技术进步使胶体金结合物的灵敏度得到提高。中国台湾胶体金检测读数仪市场价读数仪价格靠谱,欢迎咨询无锡天纵易骏了解!
免疫胶体金的制备1、制备胶体金标记蛋白质应注意的问题(1)蛋白质的预处理。蛋白质应先对低离子强度的水透析,去除盐类成分。用微孔滤膜或超速离心除去蛋白质溶液中的细小微粒。(2)低盐浓度的缓冲液。过量盐可使金颗粒发生凝集。(3)当PH接近于蛋白质等电点或略偏碱性。蛋白质所处溶解状态较适合偶联,蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量较大。(4)蛋白质适用量的选择:能使胶体金稳定的合适蛋白量再加10%即为zui佳标记蛋白量。(5)胶体金与蛋白质偶联后,加入稳定剂,以避免产生凝集。一般选用PEG(分子量为20000)和牛血清白蛋白作稳定剂。2、常见方法(1)用。(2)加入zui佳标记量的蛋白质溶液,搅拌2~3分钟。(3)加入5ml1%PEG20000溶液。(4)于10000~100000g离心,小心吸去上清液。(5)将沉淀悬浮于一定的缓冲液中,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=,置4℃保存。
胶体金溶液是指分散相粒子直径在l—150 nm之间的金溶胶,属于多相不均匀体系,颜色呈桔红色到紫红色.胶体金作为标记物用于免疫组织化学始于1971年,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合.1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体(马抗人IgG)上,建立了间接免疫胶体金染色法。1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用。胶体金在免疫化学中的这种应用,又被称为免疫金.之后,许多学者进一步证实胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质,而蛋白质的生物活性无明显改变.它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肤、抗原、核酸等生物大分子的精确定位,也可以用于日常的免疫诊断,进行免疫组织化学定位,因而在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到重视.目前电镜水平的免疫金染色(IGS),光镜水平的免疫金银染色(IGSS),以及肉眼水平的斑点免疫金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力工具.应能区分反射率差值不大于0.01的一对质控条。
胶体金蛋白结合物的质量鉴定(1)胶体金颗粒平均直径的测量:用支持膜的镍网(铜网也可)蘸取金标蛋白试剂,自然干燥后直接在透射电镜下观察。或用醋酸铀复染后观察。计算100个金颗粒的平均直径。(2)胶体金溶液的OD520nm值测定:胶体金颗粒在波长510nm~550nm之间出现*大吸收值峰。用(含1%BSA,%NaN3)将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释,OD520=。一般应用液的OD520应为~。(3)金标记蛋白的特异性与敏感性测定:采用微孔滤膜免疫金银染色法(MF-IGSSA)。将可溶性抗原(或抗体)吸附于载体上(滤纸、硝酸纤维膜、微孔滤膜),用胶体金标记的抗体(或抗原)以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体,对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定。 无锡天纵易骏可供应读数仪 欢迎来电咨询。中国台湾胶体金检测读数仪市场价
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生产企业必须能够克服大量的技术难题才能制备出能应用于诊断领域的免疫金复合物。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。虽然这种免疫金标记技术呈现出多种多样的应用方式,但目前主要应用是以快速检测试纸盒的形式使用于疾病的诊断和监测。在过去的十年里,基于膜上的快速诊断技术(包括侧向层析和渗滤两种形式)的发展为金标免疫试剂创造了巨大的市场。使用该技术制备的标记物作为检测系统中的指示试剂使用在检测敏感症、传染病、环境污染物、心梗标志物、早孕以及兽医等领域。如同其他标记结合物一样,获得成功的结果必须通过采用高质量的试剂(蛋白质和胶体金)、丰富的生产经验和对标记物产品检测结果分析的完整的知识结构,这需要与免疫金产品使用方法的终端客户培训一起进行。中国台湾胶体金检测读数仪市场价
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