胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法:根据胶体金颗粒的大小,标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心(20nm金胶粒用1200r/min,5nm金胶粒用1800r/min)20min,弃去凝聚的沉淀。然后将5nm胶体金结合物用6000g,4℃离心1h;20nm~40nm胶体金结合物,14000g,4℃离心1h.仔细吸出上清,沉淀物用含1%BSA的PB液(含0.02%NaN3),将沉淀重悬为原体积的1/10,北京单通道胶体金读数仪零售价格,4℃保存,北京单通道胶体金读数仪零售价格。 如在结合物内加50%甘油可贮存于-18℃保存一年以上,北京单通道胶体金读数仪零售价格。为了得到颗粒均一的免疫金试剂,可将上述初步纯化的结合物再进一步用10%~30%蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。层析法免疫胶体金检测试剂是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。北京单通道胶体金读数仪零售价格
胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的,其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便,且不需任何仪器设备等优点,被应用于医学检测、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应,具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移,与固定在层析材料上的针对待测物的受体(抗原或抗体)结合并发生特性免疫反应。在该过程中,抗原抗体复合物不断被积累富集,通过酶反应标记物或直观可视标记物(如胶体金)使之显色,从而达到检测目标物质的目的。北京单通道胶体金读数仪零售价格无锡天纵易骏可供应读数仪 欢迎来电咨询。
金标记方法学特点及质量控制:特异性与ELISA相似,敏感性略低于ELISA。定性检测时单个操作(NC膜条或NC反应块)、检测快速(胶体金本身为红色,不需加发色试剂,阳性反应即出现红色斑点或条带,整个操只需5—30分钟)、操作简便(蘸取或滴加标本、试剂即可)、不需特殊设备(手工)、结果明确(显红色,肉眼观察),且金标记物稳定,冷冻干燥后可在室温长期保存。金标记方法学尤其适合个人保健、床边检测、基层卫生单位检测、急诊检验、新项目小标本量筛查等。
蛋白质适用量的选择:胶体金与标记蛋白用量之比的确定:根据待标记蛋白的要求,将胶体金调好pH之后,分装10管,每管1ml.将标记蛋白(以IgG为例)以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml~50µg/ml,分别取1ml,加入上列金胶溶液中,混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后,在上述各管中加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。结果观察,对照管(未加蛋白质)和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管,均呈现出由红变蓝的聚沉现象;而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量,即为该标记蛋白质的低用量,在实际工作中,可适当增加10%~20%。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug)加到1ml胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,5分钟后加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10%即为标记蛋白量。无锡天纵易骏供应读数仪 ,有想法可以来我司咨询!
生产企业必须能够克服大量的技术难题才能制备出能应用于诊断领域的免疫金复合物。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。虽然这种免疫金标记技术呈现出多种多样的应用方式,但目前主要应用是以快速检测试纸盒的形式使用于疾病的诊断和监测。在过去的十年里,基于膜上的快速诊断技术(包括侧向层析和渗滤两种形式)的发展为金标免疫试剂创造了巨大的市场。使用该技术制备的标记物作为检测系统中的指示试剂使用在检测敏感症、传染病、环境污染物、心梗标志物、早孕以及兽医等领域。如同其他标记结合物一样,获得成功的结果必须通过采用高质量的试剂(蛋白质和胶体金)、丰富的生产经验和对标记物产品检测结果分析的完整的知识结构,这需要与免疫金产品使用方法的终端客户培训一起进行。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点。北京单通道胶体金读数仪零售价格
分别测试反射率范围为[0.2,0.8]内高、中、低反射率的3条质控条,CV≤3%。北京单通道胶体金读数仪零售价格
原料颗粒胶体金颗粒大小的选择取决于胶体金结合物的用途。如下段落描述了两个常用的胶体金应用领域:显微检测技术和快速诊断技术。显微检测技术任何1-40nm的胶体金结合物可以应用于电子显微镜和光学显微镜检测领域。然而即使在透射电镜放大25万倍的情况下,也不可能观测到1或2nm的胶体颗粒。利用银增强胶体金技术可以让终端客户能够看到胶体金标记的这种较小的抗原性位点。银增强染色技术是指通过银盐在胶体金颗粒表面沉积,使胶体金颗粒增大到在显微镜下能观察的尺寸。当所有的胶体金颗粒都是同样大小和形状时,该方法具有效率高、易控制的特点且低变异系数。使用如1-2nm的胶体金小颗粒时,由于空间位阻较大的胶体金颗粒不能标记的一些抗原决定簇位点,也变得容易接近。因而,一旦确定抗原位置,在银增强染色技术作用下,金标记变得容易联接和形成。在不采用银增强染色电镜技术的情况下,几个不同的抗原反应决定簇可能被标记在相同的片段上。在这种情况下,采用可分辨出的不同尺寸大小的胶体金标记特异性抗体,该抗体对不同反应决定簇具有特异识别。 北京单通道胶体金读数仪零售价格
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