生产企业必须能够克服大量的技术难题才能制备出能应用于诊断领域的免疫金复合物。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。虽然这种免疫金标记技术呈现出多种多样的应用方式,但目前主要应用是以快速检测试纸盒的形式使用于疾病的诊断和监测。在过去的十年里,基于膜上的快速诊断技术(包括侧向层析和渗滤两种形式)的发展为金标免疫试剂创造了巨大的市场。使用该技术制备的标记物作为检测系统中的指示试剂使用在检测敏感症、传染病、环境污染物、心梗标志物、早孕以及兽医等领域。如同其他标记结合物一样,吉林台式胶体金读数仪参考价格,吉林台式胶体金读数仪参考价格,吉林台式胶体金读数仪参考价格,获得成功的结果必须通过采用高质量的试剂(蛋白质和胶体金)、丰富的生产经验和对标记物产品检测结果分析的完整的知识结构,这需要与免疫金产品使用方法的终端客户培训一起进行。胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。吉林台式胶体金读数仪参考价格
胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的,其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便,且不需任何仪器设备等优点,被应用于医学检测、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应,具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移,与固定在层析材料上的针对待测物的受体(抗原或抗体)结合并发生特性免疫反应。在该过程中,抗原抗体复合物不断被积累富集,通过酶反应标记物或直观可视标记物(如胶体金)使之显色,从而达到检测目标物质的目的。海南胶体金检测读数仪在线议价内置多种接口,支持LIS系统。
胶体金制备大体可分为分散法和还原法两种,目前多采用还原法制备胶体金,主要包括:白磷还原法,抗坏血酸还原法,枸橼酸三钠还原法,乙醇—超声波还原法,硼氢化钠还原法和鞣酸-枸橼酸钠还原法等方法。白磷还原法制得的胶体金颗粒直径在3nm左右,颗粒大小均匀性好,但白磷易燃易爆,配置时需十分小心。枸橼酸三钠还原法在实践中常用,其工艺过程简单,重复性好,而且可通过调整溶液中枸橼酸三钠浓度,来控制胶体金颗粒大小。乙醇—超声波还原法在实践中很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术中用小颗粒胶体金外,免疫检测技术中所用胶体金颗粒一般在50nm左右。硼氢化钠还原法在实践中也很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术等研究试验使用外,金标免疫检测技术中很少使用。鞣酸-枸橼酸钠还原法为常用方法之一,可通过鞣酸的浓度来控制胶体金颗粒大小。但要注意:鞣酸溶液一定要避光保存,温度必须控制在60℃,否则会影响胶体金的均一性。
胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
标记方法的调试:为了开发、优化单一标记的胶体金结合物,研究人员通常制备小批量的多达60批次的不同胶体金结合物。每批次胶体金结合物在某一关键制备步骤上都与其它不同,各批次都被测试从而确定哪种标记技术的检测分析可能获得较好的反应结果。这类调试应该包括所有可以改善胶体金结合物的灵敏度、交叉反应以及潜在稳定性的技术参数。典型的测试应包含但不应限于抗体工作缓冲液、防腐剂的类型、盐度、表面活性剂含量、胶体金颗粒的尺寸、封闭剂的类型、总蛋白浓度、结合物工作缓冲液以及结合物的浓度。为了确定不同封闭剂的效果,建议考虑以下调试内容:封闭剂的类型(如酪蛋白、BSA、卵清蛋白、人血清白蛋白、PEG、非特异性IgG);封闭剂的纯度封闭剂的含量;封闭剂对整个测试反应的兼容性。 读数仪量大价优,欢迎咨询无锡天纵易骏了解!广东免疫层析法读数仪零售价格
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胶体金标记蛋白质影响因素:胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的,胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程,标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果,一般情况下,当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时,胶体金对蛋白质的吸附力强。反之,当胶体金pH值低于蛋白质等电点时,则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白(SPA)时,SPA等电点是pI5.1,胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时,胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品,如多价抗体的标记,实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件,可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析,胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小,金颗粒直径越小,金颗粒所具有的总表面积就越大,可吸附蛋白质的量也就越大。吉林台式胶体金读数仪参考价格
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