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溶胶的聚沉现象胶粒之间存在吸引力与排斥力这对矛盾,在溶胶胶粒带电及溶剂化的情况下,排斥力成为矛盾的主要方面,溶胶稳定而不聚沉。因为某种原因使溶胶粒带电量减到很小,甚至中和其所带电荷并能去溶剂化膜,胶粒之间可在更近的距离互相接近,引力成为主要矛盾,引力超过斥力时胶粒便聚结发生聚沉。引起溶胶聚沉的原因有。(1)少量电解质对溶胶的聚沉作用少量电解质即可使溶胶聚沉,但各种电解质的聚沉能力可用聚沉值来表示。聚沉值是在一定时间内使1L某浓度的溶胶产生聚沉所需电解质的zui小物质的量(mm01)。显然,聚沉值愈小,聚沉能力愈大。聚沉值从实验中得出如下的规则:①电解质负离子对带正电的溶胶起主要聚沉作用,正离子对带负电的溶胶起主要聚沉作用;②同价离子聚沉能力几乎相等,不同价离子的聚沉能力随离子价增加而明显增加。电解质能使溶胶聚沉是由于电解质与胶粒带相反电荷离子的作用,中和了胶粒所带的一部分电荷,使胶粒电量减少,扩散层缩小,溶剂化层变薄,而当双电子层厚度缩至很小和溶剂化层变得很薄时,两个质粒间便可以更加接近,即不产生斥力,两个胶粒间因引力加大而合并的趋势增强,甚至引力占优势以致使胶粒聚结而发生聚沉。 宁夏金标读数仪读数仪哪家品质好,欢迎咨询无锡天纵易骏了解!
原料颗粒胶体金颗粒大小的选择取决于胶体金结合物的用途。如下段落描述了两个常用的胶体金应用领域:显微检测技术和快速诊断技术。显微检测技术任何1-40nm的胶体金结合物可以应用于电子显微镜和光学显微镜检测领域。然而即使在透射电镜放大25万倍的情况下,也不可能观测到1或2nm的胶体颗粒。利用银增强胶体金技术可以让终端客户能够看到胶体金标记的这种较小的抗原性位点。银增强染色技术是指通过银盐在胶体金颗粒表面沉积,使胶体金颗粒增大到在显微镜下能观察的尺寸。当所有的胶体金颗粒都是同样大小和形状时,该方法具有效率高、易控制的特点且低变异系数。使用如1-2nm的胶体金小颗粒时,由于空间位阻较大的胶体金颗粒不能标记的一些抗原决定簇位点,也变得容易接近。因而,一旦确定抗原位置,在银增强染色技术作用下,金标记变得容易联接和形成。在不采用银增强染色电镜技术的情况下,几个不同的抗原反应决定簇可能被标记在相同的片段上。在这种情况下,采用可分辨出的不同尺寸大小的胶体金标记特异性抗体,该抗体对不同反应决定簇具有特异识别。
胶体金的质量鉴定:一、胶体金颗粒直径测定:用预先处理好的覆有Formvar膜的镍网浸入胶体金溶液内,取现放在空气中干燥或37℃烤箱烤干。然后在透射电镜下观察,主要观察金颗粒的大小,符合不符合所需要的颗粒直径,金颗粒是否均匀一致,有无椭圆形及多角形金颗粒存在。理想的金颗粒是大小基本相等,均匀一致,无椭圆形及多角形的金颗粒存在,还可以拍片放大后测量金颗粒直径的大小。二、胶体金金颗粒均匀度测定:一般需测量100个以上的胶体金颗粒,然后用统计学处理,计算胶体金颗粒的平均直径及标准差,前者反映颗粒的大小,后者说明颗粒是否均匀一致。三、影响胶体金颗粒大小的因素:如果有较多的大小不等的金颗粒及有椭圆形,三角形金颗粒存在应重新制备。一般造成这种情况的主要原因是在加还原剂的时候不是迅速一次加入,而是多次加入。再者搅拌不均匀,速度太慢没有搅拌起来,造成了颗粒大小不等。制备量的多少,容器的大小,加热的时间等也影响胶体金颗粒的大小。制备了合格的胶体金以后,放在室温或4℃保存。避免低温冻存,因为冻存可导致胶体金凝集,破坏了胶体状态。胶体金在室温避光无灰尘的环境中可放置3个月左右。冰箱内半年左右。多算法针对性数据拟合,保障了检测的准确性。
胶体金标记抗体技术:建立于20世纪70年代初,因胶体金液呈樱桃红色,故标记抗体后进行免疫染色,可直接光镜观察。金颗粒的电子密度相当高,电镜下清晰可辨。因此近年来该技术被广泛应用于生物学和医学各领域的电镜研究,自20世纪80年代开始,有取代免疫酶细胞化学电镜技术之趋势。该技术的主要优点:①省时.程序较酶标抗体法简单;②不需H2O2等处理,对组织细胞超微结构保存较好;③金颗粒电子密度高,电镜下容易识别,且易于同其他免疫反应产物区别;④可与酶标抗体或铁蛋白标记抗体等相结合进行双标记染色,研究两种不同抗原在超微结构水平的定位;⑤也可用不同直径的金颗粒标记不同的抗体,研究两种以上抗原的共存;⑥因抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少与抗原的量呈正相关,故可用于组织细胞抗原的半定量分析;⑦将胶体金标记的一抗体直接加入培养液中,利用培养细胞具有吞饮作用的特点,可进行培养细胞内的抗原定位研究;⑧金颗粒具有较强激发电子能力,故也可用于扫描电镜对细胞表面抗原或一些受体的定位观察;⑨胶体金液无毒,对人体亦无损伤。因此,胶体金标记抗体染色技术是目前免疫电镜技术很常用的理想染色方法。 无锡天纵易骏供应读数仪 ,欢迎新老客户来电!宁夏金标读数仪
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标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或(标记SPA时调到)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含~,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=,以,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含%BSA的缓冲溶液洗通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为。 中国香港胶体金检测读数仪批发价
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