时间分辨荧光免疫测定:以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点,延长荧光测量时间,待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定,所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光,从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。TR-FIA的测定原理见图17-4。以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图17-5。其中增强液的作用是使荧光信号增强,广东台式免疫荧光分析仪厂家直销。因为免疫反应完成后,生成的抗原-抗体-铕标记物复合物在弱碱性溶液中,经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2~3,铕离子很容易解离出来,并与增强液中的β-二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物,十分有利于荧光测量。想要购买荧光分析仪 ,广东台式免疫荧光分析仪厂家直销,就选无锡天纵易骏,广东台式免疫荧光分析仪厂家直销,让您满意,有想法可以来我司咨询!广东台式免疫荧光分析仪厂家直销
随着人们对食品安全的要求越来越高,国际社会上对食品中有毒有害物质的检测越来越严格,各种有毒有害物质的限量标准也在不断提高。近年来我国食品被进口国拒绝、扣留、退货、索赔和终止合同的事件时有发生,为了解决出口食品受阻和严格控制有害进口食品进入国门,保证人民的身体健康,必须找到灵敏准确的检测方法。TRFIA 是随着免疫分析和化学分析的发展而成孰起来的一种新的检测方法。作为一种灵敏度高、特异性好、安全的超微量分析测定方法,目前已成熟地应用在临床医学领域,同时也在食品安全领域崭露头角,用于快速检测食品中的大肠杆菌O157:H7、和有害金属等。相信随着检测设备的大力应用和各种检测试剂盒的不断开发,TRFIA将在食品安全领域发挥更大的作用.上海荧光分析仪品牌荧光分析仪价格靠谱,欢迎咨询无锡天纵易骏了解!
时间分辨荧光免疫分析的原理:时间分辨荧光免疫分析的原理就是使用三价稀土离子(如Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+)作为示踪物,通过这些稀土离子与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体,形成免疫复合物,由于免疫复合物中抗原抗体结合部分就含有稀土离子,当采取一些办法将结合部分与游离部分分开后,利用时间分辨荧光分析仪,即可测定复合物中的稀土离子发射的荧光强度,从而确定待测抗原的量。正常情况下,免疫复合物中的稀土离子自身荧光信号很微弱,若加入一种酸性增强液,稀土离子从免疫复合物中解离出来,和增强液中的β-二酮体、三正辛基氧化膦、Triton X-100等成分形成一种微囊。后者被激发光激发后,则稀土离子可以发出长寿命的极强的荧光信号,使原来微弱的荧光信号增强将近100万倍。采用时间分辨技术测量荧光,采用了门控技术,它是使背景荧光信号降低到零以后,再测定长寿命标记物的荧光。
荧光偏振免疫测定:荧光物质经单一平面的偏振光蓝光(波长485nm)照射后,可吸收光能跃入激发态;在恢复至基态时,释放能量并发出单一平面的偏振荧光(波长525nm)。偏振荧光的强度与荧光物质受激发时分子转动的速度成反比。大分子物质旋转慢,发出的偏振荧光强;小分子物质旋转快,其偏振荧光弱。利用这一现象建立了荧光偏振免疫测定(floutescencepolarizationimmunoassay,FPIA),用于小分子物质特别是药物的测定。FPIA的 试剂 为荧光素标记的药物和抗药物的 抗体 ,模式为均相竞争法,标本中的药物与荧光标记的药物与一定量的 抗体 竞争结合。反应平衡后,与抗体结合的荧光标记药物的量与标本中药物浓度的量呈反比。由于抗体的分子量远大于药物的分子量,游离的荧光标记药物与结合抗体的荧光标记药物所产生的偏振荧光强度相差甚远。因此在FPIA中测定的偏振荧光强度与标本中药物的浓度呈反比。无锡天纵易骏的荧光分析仪物美价优,欢迎新老客户致电!
作为免疫分析法的一种,FIA同样存在两种模式,即竞争型和夹心型。其中竞争型(以标记抗原的竞争型为例)的测定原理是基于未标记的抗原(Ag)和标记抗原(Ag-L)竞争结合有限的抗体(Ab)而实现的免疫分析法。检测时,Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag和Ab的结合使得Ag-L与Ab的免疫复合物的量减少。样品中存在的Ag越多,Ab结合的Ag-L便越少,从Ab-Ag-L免疫复合物的减少或游离Ag-L的增加,可以定量测定出样品中待测抗原的含量。其反应过程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)。对夹心型免疫分析来说,其反应原理是在免疫反应的载体上固定过量的Ab,然后加入一定量的Ag,免疫反应后,再加入过量的标记抗体(Ab-L),以形成“三明治”式夹心免疫复合物。样品中存在的Ag越多,结合的Ab-L也越多,夹心免疫复合物的标记荧光信号就越强。反应过程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。全自动免疫荧光分析仪采用 机械手式设计,完美解决模组高耦合问题,大幅降低了安装复杂度和故障率。青海免疫层析法荧光分析仪代理商
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时间分辨荧光免疫分析可用来检测生物活性物质,特别是在生物样品免疫分析中,显示出它愈来愈多的独特优点。在,抗体检测,病毒抗原分析,药物代谢分析以及各种体内或外源性超微量物质的分析中,应用TRFIA法越来越普遍。近年来,已将这项技术应用于核酸探针分析和细胞活性分析、生物大分子分析,发展十分迅速。时间分辨荧光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、所用试剂有良好的稳定性、检测限较宽、尤其是能消除常规荧光测定中的高背景等优点,是非放射免疫分析中很有发展潜力的分析方法。有关研究论文约占免疫分析文献的10%-15%。寻找、设计并合成出较理想的镧系元素螯合物探针;改进标记技术和简化分离技术;采用多重标记法进行放大,进一步提高灵敏度以及提高检测手段的程序化,进一步提高信噪比将成为时间分辨荧光免疫分析的发展方向。广东台式免疫荧光分析仪厂家直销
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