[VIP第1年] 指数:3
图2为本发明用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的标准品的扩增曲线；图3为本发明用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的标准曲线；图4为cav-ii，青山区有实力的细小病菌地址、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的特异性检测结果；图5为cav-ii、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的灵敏度检测结果；图6为cav-ii、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的重复性检测结果。具体实施方式本发明旨在提出一种对犬腺bingduii型(cav-ii)、犬细小bingdu(cpv)、犬瘟热bingdu(cdv)和犬副流感bingdu(cpiv)能同时进行鉴别及定量检测的技术。针对四种bingdu的同时鉴别与检测，青山区有实力的细小病菌地址，生物基因组是直接反应生物基本信息的一个**客观的指标，不同的bingdu所含有的基因组信息不同，通过基因组信息可将不同的bingdu分类至不同的族群，利用基因组碱基互补配对的原则，青山区有实力的细小病菌地址，可实现特异位点基因序列的大量扩增，从而通过一定的方法使得肉眼可见，实现对不同bingdu的鉴别区分以及定量检测。实时荧光定量pcr技术(quantitativereal-timepcr，qpcr)是1996年由美国appliedbiosystems公司推出的，该技术是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程。细小怎么治？哪些方法更有有效。青山区有实力的细小病菌地址
cdv-r)的核苷酸序列如sedid**2所示；用于检测犬瘟热bingdu的taqman探针(cdv-p)，所述taqman探针(cdv-p)的核苷酸序列如sedid**8所示；用于检测犬细小bingdu的上游引物(cpv-f)和下游引物(cpv-r)，其中所述上游引物(cpv-f)的核苷酸序列如sedid**3所示，所述下游引物(cpv-r)的核苷酸序列如sedid**4所示；用于检测犬细小bingdu的taqman探针(cpv-p)，所述taqman探针(cpv-p)的核苷酸序列如sedid**9所示；用于检测犬副流感bingdu的上游引物(cpiv-f)和下游引物(cpiv-r)，其中所述上游引物(cpiv-f)的核苷酸序列如sedid**5所示，所述下游引物(cpiv-r)的核苷酸序列如sedid**6所示；用于检测犬副流感bingdu的taqman探针(cpiv-p)，所述taqman探针(cpiv-p)的核苷酸序列如sedidno：20所示；所述taqman探针为经过荧光标记的，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，且所述taqman探针的3’端已经磷酸化处理。上述taqman探针(cav2-p)的5’端标记有quasar705荧光报告基团，3’端标记有bhq3荧光淬灭基团；上述taqman探针(cdv-p)的5’端标记有cy5荧光报告基团，3’端标记有bhq2荧光淬灭基团；上述taqman探针(cpv-p)的5’端标记有fam荧光报告基团。青山区有实力的细小病菌地址武汉哪里有好的动物医院？
（1）单抗的早期使用病的主要措施。应根据犬的脱水程度与全身状况，确定所需添加的成分和补液量，一般静脉补液量为60毫升/千克体重。①静脉补液5%葡萄糖液，维生素，，一次缓慢静脉滴注，2次/日。输液中要严格控制输液量和输液速度，注意心脏的功能状况，否则易造成失败。当病犬表现严重呕吐、腹泻时需纠正脱水、电解质紊乱和酸碱平衡，可静脉滴注乳酸林格氏液50～500毫升（PS：较为严重应该请求医生采用注射用碳酸氢钠。），25%葡萄糖液5～40毫升，盐酸山莨菪碱（6542）注射液0。3～1毫升，2次/日。②中期以后酸中毒较为严重，可以采用碳酸氢钠注射液，氯化钾注射液，可混合在溶剂（氯化钠注射液）***同使用，可以很好的解决酸中毒情况。[1]③腹膜腔补液如病犬静脉滴注困难，可行腹膜腔补液，用量为70毫升/千克体重。（3）可应用各类广谱，但不要长时间使用，以防肠道正常菌群失调，反而延缓肠道消化功能的恢复。（4）止吐呕吐严重者可肌注爱茂尔、灭吐灵（胃复安）～2毫升。注：呕吐主要为胃酸分泌过多狗狗长期未进食导致，胃酸分泌的同时还会导致狗狗肠胃蠕动给狗狗加剧痛苦，此时可以使用盐酸山莨菪碱（6542）注射液配合奥美拉错注射液（胶囊）来使用。
分别对步骤、cpv、cdv和cpiv基因组dna或rna进行pcr(定量pcr仪，型号cfx96，购自美国伯乐)扩增，分别得到cav-ii、cpv、cdv和cpiv的目的片段，25μl的pcr反应体系如下表1所示，pcr反应条件为：dna预变性95℃10min；pcr扩增条件(针对rna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min；rna反转录52℃15min；95℃2min；或pcr扩增条件(针对dna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min。表1：pcr扩增体系、标准品制备将纯化回收的cav-ii、cpv、cdv和cpiv含检测基因的目的片段分别克隆至pcrtopo载体(购自invitrogen公司)中，构建成重组质粒，并筛选阳性重组质粒送上海生工公司测序，验证质粒构建是否成功。测序结果表明获得了序列正确的分别携带cav-ii、cpv、cdv和cpiv目的基因的4个重组质粒，分别命名为pcrtopo-cav2-standardplasmid、pcrtopo-cdv-standardplasmid、pcrtopo-cpv-standardplasmid、pcrtopo-cpiv-standardplasmid，提取质粒dna得到标准品，分别命名为cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品。、标准曲线的建立将上述cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品分别用，并计算各标准品的拷贝数；将四种标准品等浓度混合。武汉宠物诊所哪家好？
本发明属于生物检测技术领域：中的兽医动物病原检测，具体涉及一种用于犬腺bingduii型、犬瘟热bingdu、犬细小bingdu和犬副流感bingdu的四重实时荧光定量pcr检测方法、检测试剂盒及其**引物和taqman探针。背景技术：：犬瘟热bingdu(caninedistempervirus，cdv)、犬细小bingdu(canineprvovirus，cpv)、犬副流感bingdu(canineparainfluenzavirus，cpiv)和犬腺bingduii型(canineadenovirusii，cav-ii)是犬bingdu性传染病暴发和流行的主要病原体。cdv染上引起的犬瘟热主要有呼吸型、消化型、神经型和混合型4种，cdv染上可引起全身性的免疫压制，病死率极高。cpv主要引起犬的急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎。cpiv染上主要引起犬的呼吸道疾病，是犬传染性呼吸系统疾病重要的病原之一。cav-ii型引起与呼吸道疾病和肠炎相关的犬接触性呼吸道疾病，但不引起肺炎症状，可引起幼犬咳嗽又叫犬窝咳。这四种bingdu单一染上或混合染上均可给养犬业带来严重的打击，四种犬病原临床症状较为相似，且常伴有混合染上，给临床诊断造成了一定的困难。文献cna建立了用于同时检测犬瘟热bingdu、犬细小bingdu、i型和ii型犬腺bingdu的多重pcr检测引物。汉口有哪些好的宠物医院？青山区有实力的细小病菌地址
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临床上常用的处fang为生理盐水或5%～10%葡萄糖溶液20～50毫升/千克体重，氨苄青霉素5～10毫升/千克体重，强尔心～，维生素C100毫升/千克体重，维生素K35～10毫升/千克体重，**2～5毫克/次，混合一次静脉注射，每天1～2次，同时静脉注射5%碳酸氢钠注射液50毫升/千克体重，1～2次/天，爱茂尔1～4毫升，3～6次/天肌肉注射，维迪康，有较好的疗效。有饮欲的可给予足量的口服补液盐溶液，自由饮用，没有饮欲的可进行灌服，口服补液盐溶液的配方为：氯化钠，碳酸氢钠，氯化钾，葡萄糖20克，水1000毫升。为了补充营养，可静脉注射25%～50%葡萄糖溶液、氨基酸或代血浆和白蛋白等。可大剂量应用**和山莨菪碱（654－2）溶液进行静脉或肌肉注射。为尽**出肠道内容物，可进行灌肠。一般用～，或者先用口服补液盐溶液进行灌肠，末了再用口服液盐溶液加kangjun药或抗bingdu药进行保留灌肠，也可用生理盐水、复方生理盐水、乳酸林格尔氏液灌肠。市场上有犬细小bingdu病高免血清，可以试用。据资料报道，早期使用，并配合对症治聊，有较好的疗效。但在其后期使用，意义不大。在治聊时，也可试用犬用干扰素、犬用bingdu灵。青山区有实力的细小病菌地址
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