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    在实施例1中的引物和探针的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测，25μl实时荧光定量pcr的检测体系包括：模板5μl、实时荧光定量pcr反应液2×onestepu+μl(购于vazyme公司)、onestepu+μl(购于vazyme公司)、10μm-4×混合引物μl、10μm-4×混合探针μl，rna-freeh2o5μl。实时荧光定量pcr反应条件可为：反转录52℃15min；95℃2min；pcr扩增条件：95℃15s，56℃30s，45个循环。在每个循环的退火结束时进行荧光信号检测。2)用得到的ct值或荧光信号的变化实现对cav-ii、cpv、cdv和cpiv定性检测，不同荧光通道出现标准的“s”型扩增曲线，表明待测样品中含有cav-ii、cpv、cdv和cpivbingdu，再根据荧光信号的强度和步骤，得出待测样品中所含有cav-ii、cpv、cdv和cpivbingdu的拷贝数，实现定量检测。3)具体判定方法：①若待测样品在hex通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpivbingdu核酸阳性；②若待测样品在fam通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpvbingdu核酸阳性；③若待测样品在cy5通道中的扩增曲线均为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cdvbingdu核酸阳性。武昌区治好细小病菌服务为先细小怎么治？哪些方法更有有效。

    比熊犬(详情介绍)比熊犬有时要面临着许多疾病的威胁，犬细小病du（翻肠子）就是其中对比熊伤害非常大的一种疾病。犬细小病du是目前国内仅次于犬瘟热的致死率很高的传染病，以频繁呕吐、出血性腹泻和迅速脱水为突出症状。染上幼犬的死亡率高达50%—****。下面就为大家介绍一下比熊犬细小病du性肠炎的治聊方法。一、比熊犬细小病du性肠炎症状比熊犬染上本病后经过1-2周的潜伏期，表现为典型的严重的出血性胃肠炎症状，其呕吐、腹泻和脱水方面分别具有以下特点：1.呕吐：病初比熊犬首先表现呕吐，一般先呕吐胃内未消化食物，随后的呕吐物多为清水和黏液，往往含有黄绿色的胆汁。同时食欲废绝，饮欲强烈，饮后立即呕吐，体温高达40摄氏度左右。2.腹泻：比熊犬频繁呕吐1—2天后出现腹泻，粪便由软到稀，而后带血，呈番茄汁样血便，有特殊腥臭味，可迅速弥漫整个空间。3.脱水：胃肠炎症状出现24—48小时后迅速脱水和体重减轻，随后比熊犬眼球凹陷，皮肤弹性减退，衰弱无力。血液检查红细胞压积增加，白细胞减少。二、为什么比熊会得上细小病du性肠炎一般是比熊接触了其他带病犬，通过尿液、粪便、唾液或呕吐物交叉染上。同时食物、饮水用具也可以传染细小病du。

    下游引物)：5’-cattactgagaacaatccgtaggc-3’(序列表中sedid**6)；cav2-p(taqman荧光探针)：5’-quasar705-gtcttctgccaacatgctttatccc–bhq3-3’(序列表中sedid**7)。cav2-p的报告荧光基团为quasar705，荧光淬灭基团为bhq3。cdv-p(taqman荧光探针)：5’-cy5-cctttggaggaggacagttgccttcttat-bhq2-3’(序列表中sedid**8)。cdv-p的报告荧光基团为cy5，荧光淬灭基团为bhq2。cpv-p(taqman荧光探针)：5’-fam-atggcaaacaaatagagcattgggcttacc-bhq2-3’(序列表中sedid**9)。cpv-p的报告荧光基团为fam，荧光淬灭基团为bhq2。cpiv-p(taqman荧光探针)：5’-hex-actgcaagatcagagtgaggaaggtacaatcc-bhq2-3’(序列表中sedidno：20)。cpiv-p的报告荧光基团为hex，荧光淬灭基团为bhq2。为防止pcr扩增时被延伸，所述探针的3’端已经磷酸化处理。实施例2、cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测、提取基因组dna或rna使用axypreptmbodyfluidviraldna/rnaminiprepkit(axygen公司)对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的细胞培养物(用于获得标准品和阳性对照)以及待测样品提取基因组dna或rna，具体方法包括以下步骤：(1)axygen试剂盒准备：按试剂盒说明书。武汉附近的动物医院。

    其中以3-6个月龄的纯种比熊犬易感性比较高，但是如果比熊犬得过一次，那么病愈后的比熊犬可获得免疫li。三、比熊细小病du性肠炎治聊方法比熊在生病初，应该尽快注射犬细小病du单克隆抗体或含抗犬细小病du抗体的高免血清，同时针对出血性胃肠炎与脱水症状，采取强心补液、抗jun消yan、止吐、止泻和止血对症疗法。补液疗法：生病的比熊常因脱水而死，因此补液是治聊本病的主要措施。用等渗的葡萄糖盐水加入5％碳酸氢钠注射液给予静脉注射。可根据脱水的程度决定补液量的多少。25%葡萄糖液5-40毫升，维生素c2-10毫升，能量合剂5-20毫升，一次缓慢静脉滴注，1-2次/日。有时比熊肠道出血严重时，常规止血药往往难以控制症状，应选用目前的新型止血药，以获得快速止血效果。对顽固性呕吐的患犬，建议肌注爱茂尔、氯丙嗪或硫suan阿托品止吐，并可一tian内用药多次，但因本病损害小肠严重，呕吐频繁，实际止吐效果有时并不理想。胃复安是临床常用的止吐药，但不宜用于本病止吐，其促进肠胃正向蠕动的药理效应往往造成肠道大量出血。所以治聊重点应放在止血、止泻、纠正脱水上，并对病比熊严格禁水，避免诱发频繁呕吐而使脱水不能得到有效纠正。宠物医院拍片子多少钱？正规的细小病菌价钱

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    若待测样品在cpv-p的5’端所标记的荧光报告基团所对应的通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpvbingdu阳性；若待测样品在cdv-p的5’端所标记的荧光报告基团所对应的通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cdvbingdu阳性；若待测样品在cav2-p的5’端所标记的荧光报告基团所对应的通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cav-iibingdu阳性；若待测样品32＜ct值≤38，出现“s”型扩增曲线，则结果判定为可疑，该样品需要进行复检；若待测样品ct值＞38，则结果判定为阴性；推荐地，若待测样品在hex通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpivbingdu阳性；若待测样品在fam通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpvbingdu阳性；若待测样品在cy5通道中的扩增曲线均为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cdvbingdu阳性；若待测样品在quasar705通道中的扩增曲线均为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cav-iibingdu阳性；若待测样品32＜ct值≤38，出现“s”型扩增曲线，则结果判定为可疑，该样品需要进行复检；若待测样品ct值＞38，则结果判定为阴性。武昌区治好细小病菌服务为先

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