[VIP第1年] 指数:3
末了通过标准曲线对未知模板进行定量分析(heidca，stevensj，livakkj，；6(10)：986-94.)。实时荧光定量pcr技术是一种对bingdu基因组进行检测的相对定量技术，与普通pcr技术相比，增加了一个两端带有荧光标记的寡核苷酸探针，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量准确的优点，可以利用多种荧光基团实现多种基因的检测，并可利用中间的寡核苷酸探针实现相似性较高基因的鉴别。本发明基于以上基本原理针对四种bingdu设计了四对特异性引物和四条寡核苷酸探针，利用碱基互补配对的原理，建立了一种特异性检测cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测方法，并基于设计得到的特异性引物和探针提供一种能同时检测和鉴别cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒。通过以下具体实施方式详细说明本发明。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见：《分子克隆实验指南》(《molecμlarcloning:alaboratorymanual》sambrook，j，蔡甸区有实力的细小病菌电话.，russell，davidw.，molecμlarcloning:alaboratorymanual，3rdedition，2001，蔡甸区有实力的细小病菌电话，ny，coldspringharbor)，蔡甸区有实力的细小病菌电话。所述百分比浓度如无特别说明均为质量/质量(w/w，单位g/100g)百分比浓度、质量/体积(w/v。汉阳宠物医院哪家好？蔡甸区有实力的细小病菌电话
图2为本发明用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的标准品的扩增曲线；图3为本发明用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的标准曲线；图4为cav-ii、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的特异性检测结果；图5为cav-ii、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的灵敏度检测结果；图6为cav-ii、cpv、cdv和cpiv的实时荧光定量pcr检测方法的重复性检测结果。具体实施方式本发明旨在提出一种对犬腺bingduii型(cav-ii)、犬细小bingdu(cpv)、犬瘟热bingdu(cdv)和犬副流感bingdu(cpiv)能同时进行鉴别及定量检测的技术。针对四种bingdu的同时鉴别与检测，生物基因组是直接反应生物基本信息的一个**客观的指标，不同的bingdu所含有的基因组信息不同，通过基因组信息可将不同的bingdu分类至不同的族群，利用基因组碱基互补配对的原则，可实现特异位点基因序列的大量扩增，从而通过一定的方法使得肉眼可见，实现对不同bingdu的鉴别区分以及定量检测。实时荧光定量pcr技术(quantitativereal-timepcr，qpcr)是1996年由美国appliedbiosystems公司推出的，该技术是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程。江夏区本地细小病菌收费标准武昌宠物医院哪家好？
下游引物)：5’-cattactgagaacaatccgtaggc-3’(序列表中sedid**6)；cav2-p(taqman荧光探针)：5’-quasar705-gtcttctgccaacatgctttatccc–bhq3-3’(序列表中sedid**7)。cav2-p的报告荧光基团为quasar705，荧光淬灭基团为bhq3。cdv-p(taqman荧光探针)：5’-cy5-cctttggaggaggacagttgccttcttat-bhq2-3’(序列表中sedid**8)。cdv-p的报告荧光基团为cy5，荧光淬灭基团为bhq2。cpv-p(taqman荧光探针)：5’-fam-atggcaaacaaatagagcattgggcttacc-bhq2-3’(序列表中sedid**9)。cpv-p的报告荧光基团为fam，荧光淬灭基团为bhq2。cpiv-p(taqman荧光探针)：5’-hex-actgcaagatcagagtgaggaaggtacaatcc-bhq2-3’(序列表中sedidno：20)。cpiv-p的报告荧光基团为hex，荧光淬灭基团为bhq2。为防止pcr扩增时被延伸，所述探针的3’端已经磷酸化处理。实施例2、cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测、提取基因组dna或rna使用axypreptmbodyfluidviraldna/rnaminiprepkit(axygen公司)对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的细胞培养物(用于获得标准品和阳性对照)以及待测样品提取基因组dna或rna，具体方法包括以下步骤：(1)axygen试剂盒准备：按试剂盒说明书。
第二，当犬群暴发本病后，应及时隔离，对犬舍和饲具，用2%～4%烧碱、1%福尔马林、0。5%过氧乙酸或5%～6%次氯酸钠反复消毒。
第三，适当用药，不要滥用抗生以及其他药：这段请大家务必仔细看
犬细小分为两种，一种会导致母狗难产，这种症状是大部分细小属的共同点，大部分细小都会造成宿主难产，死胎等。第二种为我们为常见的，分为肠炎型以及心肌炎型，心肌炎型多见于幼犬，幼犬发病率相当高，在10%上下，无明显症状，前期症状偶尔有呕吐，轻微腹泻等，但是突然发病身亡。本人养狗的时候，不幸碰到过心肌炎型，狗狗突然变得特别蔫，不吃东西，不喝水，而且拉稀，第二天突然好转，第三天早晨甚至可以吃东西，但是中午突然暴毙身亡。这是部分特征，参考用。 武昌有哪些好的宠物医院？
比熊犬(详情介绍)比熊犬有时要面临着许多疾病的威胁，犬细小病du（翻肠子）就是其中对比熊伤害非常大的一种疾病。犬细小病du是目前国内仅次于犬瘟热的致死率很高的传染病，以频繁呕吐、出血性腹泻和迅速脱水为突出症状。染上幼犬的死亡率高达50%—****。下面就为大家介绍一下比熊犬细小病du性肠炎的治聊方法。一、比熊犬细小病du性肠炎症状比熊犬染上本病后经过1-2周的潜伏期，表现为典型的严重的出血性胃肠炎症状，其呕吐、腹泻和脱水方面分别具有以下特点：1.呕吐：病初比熊犬首先表现呕吐，一般先呕吐胃内未消化食物，随后的呕吐物多为清水和黏液，往往含有黄绿色的胆汁。同时食欲废绝，饮欲强烈，饮后立即呕吐，体温高达40摄氏度左右。2.腹泻：比熊犬频繁呕吐1—2天后出现腹泻，粪便由软到稀，而后带血，呈番茄汁样血便，有特殊腥臭味，可迅速弥漫整个空间。3.脱水：胃肠炎症状出现24—48小时后迅速脱水和体重减轻，随后比熊犬眼球凹陷，皮肤弹性减退，衰弱无力。血液检查红细胞压积增加，白细胞减少。二、为什么比熊会得上细小病du性肠炎一般是比熊接触了其他带病犬，通过尿液、粪便、唾液或呕吐物交叉染上。同时食物、饮水用具也可以传染细小病du。汉阳动物医院哪家好？蔡甸区有实力的细小病菌电话
细小不可怕，胆汁酸促进狗狗迅速恢复。蔡甸区有实力的细小病菌电话
按照10倍梯度将标准品混合液稀释至1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101copies/μl的梯度浓度作为标准样品，每个标准样品做3个重复，以不同浓度的标准样品作为模板，在实施例1中的引物和taqman探针的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测。其中实时荧光定量pcr的反应体系(25μl)如下表2所示：表2：四重实时荧光定量pcr的反应体系试剂名称体积(μl)2×onestepu+mix(购自vazyme公司)(购于vazyme公司)μm-4×混合引物μm-4×混合探针：反转录52℃15min；95℃2min；pcr扩增条件：95℃15s，56℃30s，45个循环。各标准品的实时荧光定量pcr扩增曲线如图2所示，标准品扩增曲线为平滑的“s”形曲线(阳性)，图2中六组不带符号的线条从左向右对应的是cpv标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带△的线条从左向右对应的是cpiv标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带□的线条从左向右对应的是cav2标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带×的线条从左向右对应的是cdv标准品。 蔡甸区有实力的细小病菌电话
武汉市宠乐康动物医院成立于2019-07-11，注册资本：10万元以下。该公司服务型的公司。公司致力于为客户提供安全、质量有保证的质量产品及服务，是一家个体经营企业。公司始终坚持客户需求优先的原则，致力于提供高质量的宠物医院，动物医院，猫瘟，细小。宠物康动物医院以创造***产品及服务的理念，打造高指标的服务，引导行业的发展。
文章来源地址: http://yyby.chanpin818.com/xqyy/deta_5144711.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。