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    cdv-r)的核苷酸序列如sedid**2所示；用于检测犬瘟热bingdu的taqman探针(cdv-p)，所述taqman探针(cdv-p)的核苷酸序列如sedid**8所示；用于检测犬细小bingdu的上游引物(cpv-f)和下游引物(cpv-r)，其中所述上游引物(cpv-f)的核苷酸序列如sedid**3所示，所述下游引物(cpv-r)的核苷酸序列如sedid**4所示；用于检测犬细小bingdu的taqman探针(cpv-p)，所述taqman探针(cpv-p)的核苷酸序列如sedid**9所示；用于检测犬副流感bingdu的上游引物(cpiv-f)和下游引物(cpiv-r)，其中所述上游引物(cpiv-f)的核苷酸序列如sedid**5所示，所述下游引物(cpiv-r)的核苷酸序列如sedid**6所示；用于检测犬副流感bingdu的taqman探针(cpiv-p)，所述taqman探针(cpiv-p)的核苷酸序列如sedidno：20所示；所述taqman探针为经过荧光标记的，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，硚口区好的细小病菌欢迎来电，硚口区好的细小病菌欢迎来电，且所述taqman探针的3’端已经磷酸化处理，硚口区好的细小病菌欢迎来电。上述taqman探针(cav2-p)的5’端标记有quasar705荧光报告基团，3’端标记有bhq3荧光淬灭基团；上述taqman探针(cdv-p)的5’端标记有cy5荧光报告基团，3’端标记有bhq2荧光淬灭基团；上述taqman探针(cpv-p)的5’端标记有fam荧光报告基团。武昌哪有好的动物医院？硚口区好的细小病菌欢迎来电

    而拷贝数低或无拷贝数的样品bingdu含量不足，不能进行成品苗的配制，且s1-s3为cav2型bingdu疫苗半成品，s4-s6为cdvbingdu疫苗半成品，s7-s8为cpvbingdu疫苗半成品，s9-s10为cpivbingdu疫苗半成品，s11-s12为四种bingdu疫苗半成品。经检测s1-s3cav2型bingdu疫苗半成品可用于配苗，s4、s6cdvbingdu疫苗半成品可用于配苗，而s5拷贝数不达标不可用于配苗，s7cpvbingdu疫苗半成品可用于配苗，而s8拷贝数不达标不可用于配苗，s9-s10cpivbingdu疫苗半成品可用于配苗，s11-s12四种bingdu疫苗半成品可用于配制四联苗。实施例6、犬只源细胞检测使用实施例4的试剂盒对金宇保灵生物药品有限公司疫苗研究室提供的5份犬只源细胞的bingdu染上情况进行检测，检测方法与实施例2中步骤，待测样品编号为t1-t5，检测结果如下表6所示，可见本发明提供的对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测的试剂盒能够实现对犬只源细胞中bingdu染上的定性检测及bingdu含量的定量检测，可为疫苗生产过程中源材料的质量监控提供有力依据，确保疫苗生产的安全。表6：5份犬只源细胞样品的四重实时荧光定量pcr检测结果根据上表6的定性和定量检测结果。一般的细小病菌常见问题细小怎么治？哪些方法更有有效。

述的引物和taqman探针组的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测，检测结束后，以各标准品的浓度log值(x轴)对其相应ct值(y轴)作图，绘制标准曲线；2)提取待测样品的基因组dna或rna，以提取的基因组dna或rna为模板，在上述的引物和taqman探针组的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测；3)用得到的ct值或荧光信号的变化实现对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的定性检测，再根据荧光信号的强度和步骤1)中的标准曲线，得出待测样品中所含犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的拷贝数，实现定量检测。上述步骤1)和步骤2)中的25μl实时荧光定量pcr检测体系包括：模板5μl、实时荧光定量pcr反应液2×onestepu+μl(购于vazyme公司)、onestepu+μl(购于vazyme公司)、10μm-4×混合引物μl、10μm-4×混合探针μl，rna-freeh2o5μl；上述步骤1)和步骤2)中的四重实时荧光定量pcr检测条件为：反转录52℃15min，95℃2min；pcr扩增95℃15s，52℃30s，45个循环。上述步骤3)中的判定方法为：若待测样品在cpiv-p的5’端所标记的荧光报告基团所对应的通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpivbingdu阳性。

    本发明属于分子生物学技术领域，涉及鸡细小bingdu与h9亚型禽流感bingdu二重pcr检测引物组、试剂盒及方法。鸡细小bingdu(chinckenparvovirus，chpv)是引发鸡群发生肠道疾病的重要bingdu之一，临床上以腹泻、呈现精神抑郁和生长迟缓及料肉比增加等为特征。chpv主要侵害雏鸡，主要造成患病鸡腹泻和发育不良，该bingdu在某些鸡群中普遍存在，研究发现在发育障碍与矮小综合征鸡群的血清中能检测出chpvdna。流行病学调查表明其在商品肉鸡染上率较高、蛋鸡或种鸡次之。近年来研究表明chpv在全球多个国家的鸡群中普遍存在，且近年来相继在北美的美国和巴西、东欧的波兰和匈牙利、克罗地亚及亚洲的韩国和中国等地区发现报道。禽流感bingdu(avianinfluenzavirus,aiv)是正黏bingdu科中a型流感bingdu属成员。根据其表面抗原血凝素蛋白(hemagglutinin,ha)和神经氨酸酶蛋白(neuraminidase,na)的差异可以将aiv划分为16种不同的ha亚型(h1～h16)和9种不同的na亚型(n1～n9)。依据aiv对鸡致病性的强弱，aiv还可以分为高致病性aiv(hpaiv)和低致病性aiv(lpaiv)。h9亚型禽流感bingdu自1966年在美国初次被发现，随后我国广东地区也于1994年初次在发病鸡体内发现了该亚型aiv。武昌动物医院哪家好？

    刘畅等人进行了cdv、cpv、cav-2及cpiv多重pcr的建立及应用的研究(刘畅等，cdv、cpv、cav-2及cpiv多重pcr的建立及应用，《中国动物检疫》，2017年11期)；文献cna公开了一种鉴别犬细小bingdu、犬瘟热bingdu、犬副流感bingdu和犬腺bingdu2型的四重pcr检测方法。但这些多重pcr检测方法均存在检测灵敏度低的问题，不能实现对犬细小bingdu、犬瘟热bingdu、犬副流感bingdu和犬腺bingdu2型进行有效的鉴别和定量检测。技术实现要素：针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供一种用于对犬腺bingduii型(cav-ii)、犬细小bingdu(cpv)、犬瘟热bingdu(cdv)和犬副流感bingdu(cpiv)进行四重实时荧光定量pcr检测及鉴别的引物和taqman探针组，包含：用于检测犬腺bingduii型的上游引物(cav2-f)和下游引物(cav2-r)，其中所述上游引物(cav2-f)的核苷酸序列如sedidno：9所示，所述下游引物(cav2-r)的核苷酸序列如sedid**0所示；用于检测犬腺bingduii型的taqman探针(cav2-p)，所述taqman探针(cav2-p)的核苷酸序列如sedid**7所示；用于检测犬瘟热bingdu的上游引物(cdv-f)和下游引物(cdv-r)，其中所述上游引物(cdv-f)的核苷酸序列如sedid**1所示，所述下游引物。细小恢复病情方法分为几种？汉南区大型的细小病菌联系方式

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