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    单位g/100ml)百分比浓度或体积/体积(v/v，单位ml/100ml)百分比浓度。实施例中描述到的各种生物材料的取得途径*是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本发明生物材料来源的限制。事实上，所用到的生物材料的来源是广大的，任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用。所用引物由上海生工有限公司合成；所用探针由上海生工基因公司合成。实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，实施例将有助于理解本发明，但不应作为对本发明内容的限制。实施例1、设计引物和taqman探针从ncbi的核酸数据库genbank(，蔡甸区治好细小病菌.)分别检索获得cavii型的hexon区域基因(cavii型genbank号：，列表中sedid**)的序列、cdv的h基因(cdvgenbank号：，序列表中sedidno：2)的序列、cpv型的vp2基因(cpvgenbank号：，序列表中sedidno：3)的序列、cpiv型的np基因(cpivgenbank号：，序列表中sedidno：4)的序列，用dnaman软件进行比对后，根据引物、taqman探针设计原则，在充分考虑四种bingdu保守区的差异的基础上，**终确定：cavii的检测序列为ii型cavhexon基因5’端第1765-1960位碱基，序列表中sedidno：5所示。武汉华农宠物医院！！蔡甸区治好细小病菌

    分别对步骤、cpv、cdv和cpiv基因组dna或rna进行pcr(定量pcr仪，型号cfx96，购自美国伯乐)扩增，分别得到cav-ii、cpv、cdv和cpiv的目的片段，25μl的pcr反应体系如下表1所示，pcr反应条件为：dna预变性95℃10min；pcr扩增条件(针对rna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min；rna反转录52℃15min；95℃2min；或pcr扩增条件(针对dna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min。表1：pcr扩增体系、标准品制备将纯化回收的cav-ii、cpv、cdv和cpiv含检测基因的目的片段分别克隆至pcrtopo载体(购自invitrogen公司)中，构建成重组质粒，并筛选阳性重组质粒送上海生工公司测序，验证质粒构建是否成功。测序结果表明获得了序列正确的分别携带cav-ii、cpv、cdv和cpiv目的基因的4个重组质粒，分别命名为pcrtopo-cav2-standardplasmid、pcrtopo-cdv-standardplasmid、pcrtopo-cpv-standardplasmid、pcrtopo-cpiv-standardplasmid，提取质粒dna得到标准品，分别命名为cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品。、标准曲线的建立将上述cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品分别用，并计算各标准品的拷贝数；将四种标准品等浓度混合。蔡甸区治好细小病菌武汉阳逻的宠物医院。

    cdv的检测序列为cdvh基因5’端第1106-1253位碱基，序列表中sedidno：6所示；cpv的检测序列为cpvvp2基因5’端第642-828位碱基，序列表中sedidno：7所示；cpiv的检测序列为cpivnp基因5’端第49-216位碱基，序列表中sedidno：8所示。用，分别获得多组对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的引物及taqman探针，以同时能对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行检测为目标，经过差异位点的分析比对，并通过交叉实验验证从中推荐能同时对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行实时荧光定量pcr检测的引物及taqman探针，确定序列如下：cav2-f(上游引物)：5’-gatgtaaatgaccagtcctttgc-3’(序列表中sedidno：9)cav2-r(下游引物)：5’-agtaggggtcgtaaggtgagc-3’(序列表中sedid**0)；cdv-f(上游引物)：5’-agaaacaagaggagcaaaaaaactg-3’(序列表中sedid**1)cdv-r(下游引物)：5’-tcaatgcttggatctagaggtaatg-3’(序列表中sedid**2)；cpv-f(上游引物)：5’-tgaacttgctacagggacatttt-3’(序列表中sedid**3)cpv-r(下游引物)：5’-atttcccatttgagttacaccac-3’(序列表中sedid**4)；cpiv-f(上游引物)：5’-catatgagcgattcacactcactc-3’(序列表中sedid**5)cpiv-r。

    A)、肠炎型：1、潜伏期为7~14天。2、一般先呕吐后腹泻，粪便呈黄色或灰黄色，内含多量粘液和伪膜。3、病后2~3天，粪便呈番茄汁样，混有血丝，并有特殊腥味。4、病犬很快呈现脱水症状，此时病犬精神沉郁，食欲废绝，体温升至40摄氏度以上，渴欲增加。5、有的病犬到后期体温低于常温，可视黏膜苍白，尾部及后腹部常被粪便污染，严重者肛门松弛并开张。B)、心肌炎型：幼犬呼吸困难，心悸亢进，可视黏膜苍白，体质衰竭，常突然死亡。三、犬细小病du的防范措施1、本病的预防是接种疫苗，一般是与犬瘟热等传染性疾病一起采用六联疫苗或七联疫苗共免的方式;2、本病的病程快，年龄越小的犬病死率越高，早期治聊非常重要;3、心肌炎型病犬病程急剧，迅速恶化，常来不及救治即已死亡;4、肠炎型病犬若能及时合理治聊，可明显降低死亡率。一般采用犬细小病du高免血清治聊，并针对病情用葡萄糖盐水补液，应用利巴韦林抗病du，**或卡那霉素抗继发染上，同时肌注维生素K;四、参考治聊方案：1、免疫血清：早期使用可提高疗效。如果家中有多只宠物犬，一旦有犬确诊为本病，应立即给其他犬注射高免血清或康复犬血清。高免血清的用量为，康复犬血清，连用3～5天。 武汉江夏的宠物医院。

    狗狗传染病可能是犬细小病du和犬瘟热病du等导致犬细小病du病的消毒措施犬细小病du是世界上其中一种**小的病菌，由3个蛋白质组成，是极度简单的病菌。正是由于它是如此简单的生物，这意味着这种病菌很难被分裂，所以要消灭它是非常的难。一般来说它们对绝大部分的清洁剂品免疫，它们能在适当的环境中存活1年。这种病菌对氯胺和甲醛较为敏感，次氯酸盐钠，一般来说就是家庭用的漂白水是对付犬细小病菌唯yi**常用的消毒剂。如何进行消毒发现本病应立即进行隔离饲养。防止患病狗狗和家长与健康狗狗接触，用2％火碱水或10-20％漂白粉等反复消毒。要特别提醒的是，如果您家曾有发生此病的小狗，即使环境已经消毒，也千万不要再把没有打过全部疫苗的其他小狗带回家，否则很快就会传染发病。很重要的一点是，如果狗狗死于犬细小病du，除了不断要用漂白水清理狗舍和狗狗狗日常生活的地方外，要记住这种病du可以存活1年之久，所以比较好等1年以后才养另外一只狗狗，以免悲剧再发生。所以如果可以的话您是否能先把狗狗先养在您的亲戚朋友家，过段时间再抱回家养。安全第yi，当然如果您实在有困难的话，也只能提醒您多多消毒，然后祈祷这只狗狗的抵抗力能强些。有很多专业消毒药剂。武汉动物诊所哪家好？蔡甸区治好细小病菌

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