[VIP第1年] 指数:3
单位g/100ml)百分比浓度或体积/体积(v/v，单位ml/100ml)百分比浓度。实施例中描述到的各种生物材料的取得途径*是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本发明生物材料来源的限制。事实上，所用到的生物材料的来源是广大的，任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用，青山区细小病菌。所用引物由上海生工有限公司合成；所用探针由上海生工基因公司合成。实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，实施例将有助于理解本发明，但不应作为对本发明内容的限制。实施例1、设计引物和taqman探针从ncbi的核酸数据库genbank(.)分别检索获得cavii型的hexon区域基因(cavii型genbank号：，列表中sedid**)的序列、cdv的h基因(cdvgenbank号：，青山区细小病菌，序列表中sedidno：2)的序列、cpv型的vp2基因(cpvgenbank号：，序列表中sedidno：3)的序列、cpiv型的np基因(cpivgenbank号：，序列表中sedidno：4)的序列，青山区细小病菌，用dnaman软件进行比对后，根据引物、taqman探针设计原则，在充分考虑四种bingdu保守区的差异的基础上，**终确定：cavii的检测序列为ii型cavhexon基因5’端第1765-1960位碱基，序列表中sedidno：5所示。
使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的阳性对照品混合或直接使用混合包装的阳性对照品。上述试剂盒中还包括标准品：cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品；各标准品为单一包装或等浓度混合包装；使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的标准品等浓度混合或直接使用混合包装的标准品。上述的引物和taqman探针组或上述的试剂盒在对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的检测中的应用。上述的检测应用为用实时荧光定量pcr技术对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的定性、定量检测方法，包括以下步骤：1)建立标准曲线：将cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品等浓度混合，按照10倍梯度将混合液中各标准品浓度稀释至1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101copies/μl；以不同浓度的标准品混合液作为模板。
本发明属于分子生物学技术领域，涉及鸡细小bingdu与h9亚型禽流感bingdu二重pcr检测引物组、试剂盒及方法。鸡细小bingdu(chinckenparvovirus，chpv)是引发鸡群发生肠道疾病的重要bingdu之一，临床上以腹泻、呈现精神抑郁和生长迟缓及料肉比增加等为特征。chpv主要侵害雏鸡，主要造成患病鸡腹泻和发育不良，该bingdu在某些鸡群中普遍存在，研究发现在发育障碍与矮小综合征鸡群的血清中能检测出chpvdna。流行病学调查表明其在商品肉鸡染上率较高、蛋鸡或种鸡次之。近年来研究表明chpv在全球多个国家的鸡群中普遍存在，且近年来相继在北美的美国和巴西、东欧的波兰和匈牙利、克罗地亚及亚洲的韩国和中国等地区发现报道。禽流感bingdu(avianinfluenzavirus,aiv)是正黏bingdu科中a型流感bingdu属成员。根据其表面抗原血凝素蛋白(hemagglutinin,ha)和神经氨酸酶蛋白(neuraminidase,na)的差异可以将aiv划分为16种不同的ha亚型(h1～h16)和9种不同的na亚型(n1～n9)。依据aiv对鸡致病性的强弱，aiv还可以分为高致病性aiv(hpaiv)和低致病性aiv(lpaiv)。h9亚型禽流感bingdu自1966年在美国初次被发现，随后我国广东地区也于1994年初次在发病鸡体内发现了该亚型aiv。
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