[VIP第1年] 指数:3
末了通过标准曲线对未知模板进行定量分析(heidca，stevensj，livakkj，；6(10)：986-94.)。实时荧光定量pcr技术是一种对bingdu基因组进行检测的相对定量技术，与普通pcr技术相比，增加了一个两端带有荧光标记的寡核苷酸探针，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量准确的优点，可以利用多种荧光基团实现多种基因的检测，并可利用中间的寡核苷酸探针实现相似性较高基因的鉴别。本发明基于以上基本原理针对四种bingdu设计了四对特异性引物和四条寡核苷酸探针，利用碱基互补配对的原理，建立了一种特异性检测cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测方法，并基于设计得到的特异性引物和探针提供一种能同时检测和鉴别cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒。通过以下具体实施方式详细说明本发明。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见：《分子克隆实验指南》(《molecμlarcloning:alaboratorymanual》sambrook，j.，russell，davidw.，molecμlarcloning:alaboratorymanual，硚口区治好细小病菌多少钱，3rdedition，2001，硚口区治好细小病菌多少钱，ny，coldspringharbor)，硚口区治好细小病菌多少钱。所述百分比浓度如无特别说明均为质量/质量(w/w，单位g/100g)百分比浓度、质量/体积(w/v。
使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的阳性对照品混合或直接使用混合包装的阳性对照品。上述试剂盒中还包括标准品：cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品；各标准品为单一包装或等浓度混合包装；使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的标准品等浓度混合或直接使用混合包装的标准品。上述的引物和taqman探针组或上述的试剂盒在对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的检测中的应用。上述的检测应用为用实时荧光定量pcr技术对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的定性、定量检测方法，包括以下步骤：1)建立标准曲线：将cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品等浓度混合，按照10倍梯度将混合液中各标准品浓度稀释至1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101copies/μl；以不同浓度的标准品混合液作为模板。
（1）单抗的早期使用病的主要措施。应根据犬的脱水程度与全身状况，确定所需添加的成分和补液量，一般静脉补液量为60毫升/千克体重。①静脉补液5%葡萄糖液，维生素，，一次缓慢静脉滴注，2次/日。输液中要严格控制输液量和输液速度，注意心脏的功能状况，否则易造成治聊失败。当病犬表现严重呕吐、腹泻时需纠正脱水、电解质紊乱和酸碱平衡，可静脉滴注乳酸林格氏液50～500毫升（PS：较为严重应该请求医生采用注射用碳酸氢钠。），25%葡萄糖液5～40毫升，盐酸山莨菪碱（6542）注射液0。3～1毫升，2次/日。②中期以后酸中毒较为严重，可以采用碳酸氢钠注射液，氯化钾注射液，可混合在溶剂（氯化钠注射液）中gong同使用，可以很好的解决酸中毒情况。[1]③腹膜腔补液如病犬静脉滴注困难，可行腹膜腔补液，用量为70毫升/千克体重。（3）kangjun消yan可应用各类广谱抗生su，但不要长时间使用，以防肠道正常菌群失调，反而延缓肠道消化功能的恢复。（4）止吐呕吐严重者可肌注爱茂尔、灭吐灵（胃复安）～2毫升。注：呕吐主要为胃酸分泌过多狗狗长期未进食导致，胃酸分泌的同时还会导致狗狗肠胃蠕动给狗狗加剧痛苦，此时可以使用盐酸山莨菪碱（6542）注射液配合奥美拉错注射液。
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