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每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的柠檬酸缓冲液()进行显色反应，10-20min内测定405nm波长下的od值。结果显示，本发明单克隆抗体为igg2b型鼠源单克隆抗体。二，陕西提供dMMR抗体检测试剂来电咨询，陕西提供dMMR抗体检测试剂来电咨询、亲和常数测定包被msh6重组蛋白，包被浓度为2μg/ml,100μl/孔，4℃包被过夜，陕西提供dMMR抗体检测试剂来电咨询，pbs-t洗3次。每孔加200μl封闭液37℃封闭2h，pbs-t洗3次。实施例4中纯化的单克隆抗体，从1：200开始2倍梯度稀释，***1孔留空白对照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp标记的羊抗鼠二抗1：20000稀释，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的柠檬酸-磷酸缓冲液显色10min，加50μ。用酶标仪测定波长450nm的吸光值。画出od值对应抗体稀释倍数的曲线，找出≥1/2“平台od值”对应的稀释倍数a。利用下列公式计算出亲和常数为×109。三、单抗反应特异性和应用效果选择msh6重组蛋白，用免疫印迹的方法检测本发明单克隆抗体的识别特异性，免疫印迹实验过程如下：每种蛋白上样约5-10ng，进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳。按常规方法在bio-rad电转移系统中将凝胶蛋白带转移到pvdf膜上(millipore公司)。将膜置于含5％脱脂奶粉的tbs-t封闭液中4℃过夜。加入单克隆抗体msh6。迈杰转化医学基于基因组学、蛋白质组学、细胞组学及病理学等综合性转化医学全平台。陕西提供dMMR抗体检测试剂来电咨询
微卫星不稳定（microsatellite instability, MSI）
微卫星不稳定性是指与同一个体的正常组织细胞的DNA相比，liu细胞的基因组DNA中单个、两个、三个、四个或五个核苷酸组成的重复序列的长度发生了改变。liu组织表现出的微卫星不稳定性可按照所测标记物的不稳定程度分为高不稳定性（MSI-H）、低不稳定性（MSI-L）和微卫星稳定（MSS）。
错配修复缺陷（differentMismatchRepair,dMMR）DNA错配修复系统MMR（MismatchRepair）是由一系列高度保守的基因及其表达的产物酶构成，具有维持DNA复制的高保真度和基因组稳定性、降低自发突变的功能。DNA错配修复系统缺陷会造成微卫星不稳定情况。通常认为dMMR与MSI-H在生物学上具有一致性，而MSI-L和MSS则是MMR正常（proficientmismatchrepair，pMMR）的表型。 广东专注dMMR抗体检测试剂经验丰富迈杰转化医学利用新一代智能技术补充传统医学的检测模式，赋能医疗健康建设，更好地为临床和患者服务。
结直肠ai是常见的消化道恶性liu，在我国，特别是在现代化发展迅速的大都市里，结直肠ai发病率的上升趋势更为明显。染色体不稳定(chromosomalinstability，CIN)途径和微卫星不稳定(microsatelliteinstability，MSI)途径是结直肠ai发生的两条主要分子途径。前者占散发性结直肠ai的75％，绝大多数存在APC基因的突变和染色体18q的缺失，并有较高比例的KRAS和p53基因突变，好发于左半结肠，组织学类型以高、中分化为主。后者占散发性结直肠ai的15％，多见于右半结肠，组织学类型以黏液腺ai和低分化腺ai为常见，而且几乎所有的Lynch综合征相关性结直肠ai均通过MSI途径发生。更为重要的是，MSI结直肠ai不*在好发部位、常见组织形态上与CIN结直肠ai存在差异，而且在临床预后、***、遗传性liu筛查方案的选择上也有所不同，因此必须在临床工作中将其区分开来。本文主要就MSI结直肠ai、Lynch综合征的病理特点、发生机制、筛查策略及其临床意义做一论述。一、DNA错配修复(mismatchrepair)系统与MSI结直肠ai错配修复系统的功能是纠正DNA复制过程出现的错误，确保复制过程的“保真性”。错配修复蛋白包括MutS和MutL两大家族，前者包括MSH2／MSH3和MSH6等，后者包括MLH1、MLH3、PMS1和PMS2。
SepulvedaAR等综合众多研究发现其他的RAS突变（包括KRAS3、4号外显子及NRAS的2、3、4外显子）的突变率约为。KRAS属于RAS基因家族（HRAS，NRAS，KRAS）中的一员，编码GTP/CDP结合蛋白，其作为EGFR下游信号通路的重要效应分子，主要***RAF-MAPK通路进行后续信号转导，参与细胞的生长调控，在抗细胞调亡，介导**侵袭和转移，乃至**引起的新血管生成中起作用。结直肠ai中约32%~40%的患者存在KRAS基因突变，存在KRAS突变的患者中约85%~90%的突变集中在第2号外显子的12、13密码子上，其余突变中约5%发生在61密码子上，5%发生在146外显子上。结肠直肠ai中KRAS基因的突变状态对靶向***的选择有着决定性的作用。CRYSTAL研究将西妥昔单抗联合FOLFIRI方案化疗对比单纯化疗，结果发现KRAS突变状态与***反应率相关，在RAS野生型的患者中，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P＜），中位PFS分别为（P＜），中位OS分别为（P＜）。而在RAS突变型的患者中，西妥昔单抗的加入并未获得生存优势，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P=），中位PFS分别为（P=），中位OS分别为（P=）。新RAS突变的患者亦是如此，西妥昔单抗的加入同样未取得生存获益，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P=）。MSH2抗体试剂 苏苏械备20180568号.
dMMR较pMMR有更好的DFS，但远端结肠（脾区、降结肠和乙状结肠）未见差异，反而可能更差，近端pMMR较远端结肠ai预后更差。PETACC-3研究结果显示右半结肠aiMSI-H发生率是左半的5倍；无论左半还是右半，MSI-H患者有更好的RFS；在右半肠ai中，MSI-H的患者OS好于MSI-L/MSS患者，而左半肠中无上述表现；对于II期左半结肠ai，MSI-H与MSI-L/MSS的RFS相似；而III期右半结肠ai，MSI-H的RFS明显好于MSI-L/MSS患者。2.微卫星状态在结肠ai辅助化疗中疗效预测作用Ribic等研究发现MSI-H的患者不能从单药5-FU的辅助化疗中获益，5年生存率提高5%的患者不到1%；而MSI-L/MSS患者可明显提高生存，死亡风险下降28%。Jover等的研究结果进一步支持dMMR的II、III期结直肠ai患者不能从氟尿嘧啶的辅助化疗中获益的结论，多因素分析显示，MMR状态是氟尿嘧啶单药术后辅助化疗疗效的**影响因素。因此NCCN指南推荐既往患有直肠ai或结肠ai的所有个体都应进行MMR或MSI检测、II期MSI-H患者预后较好，而且不能从5-FU辅助***中获益、对于II期结肠ai是否需要辅助化疗，在做临床决策时需要考量的另一个重要信息就是微卫星不稳定性（MSI）。而我国2018版CSCO指南同样建议如为dMMR（错配修复缺陷）或MSI-H。迈杰转化医学可以提供覆盖肺ai、肠ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多种实体瘤的上百项检测项目。陕西推荐dMMR抗体检测试剂经验丰富
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MSH2和MLH1分别与其同源错配修复蛋白组成复合体发挥作用。MSH2分别与MSH6、MSH3组成复合体MutSα、MutSβ。MLH1则分别与PMS2、PMS1或MLH3形成复合体MutLα、MutLβ或MutLγ。MutSα或MutSβ识别了错配碱基后，与DNA碱基结合，再与MutL结合，***ATP酶，水解错配的碱基，同时***核酸内切酶1，切除并修复错配的碱基。微卫星(microsatellite)***存在于原核及真核生物基因组中，具有较高的遗传稳定性，但在错配修复基因功能发生异常时，子代细胞微卫星的重复核苷酸数量可增多或减少，导致微卫星的长度不再保持一致，这种现象称MSI。错配修复基因发生突变或启动子甲基化可引起DNA错配修复功能的降低，导致MSI。很多重要的生长调节相关基因如Ⅱ型TGF-β、IGF2R、PTEN、BAX等的编码区或启动子区含有微卫星，错配修复异常导致的MSI可引起这些基因在复制过程中发生错义突变或移码突变，这种复制错误不断累积，**终造成liu的发生，而MSI则可作为经此途径发生的结直肠ai的分子标志物。人类基因组中的微卫星位点很多，1998年MSI国际研究合作组织推荐对Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250五个位点进行检测，根据微卫星位点不稳定的数量将结直肠ai分为高频MSI(MSI-H。陕西提供dMMR抗体检测试剂来电咨询
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