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筛选出分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞株abm58060-20a2-pu。将此细胞株转入t-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。实施例3腹水诱生法制备单克隆抗体一、腹水制备对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起，计数～5×105，1ml。悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃离心4000rpm，10min。小心吸出中间的腹水收集于离心管中，4℃或-20℃保存。二、单克隆抗体的纯化用hitraprproteinaff(ge公司)亲和层析法按说明书从腹水中纯化抗体。sds-page胶鉴定纯度，bradford法测定浓度，广东专注dMMR抗体检测试剂值得推荐。纯化的抗体保存于-20℃。实施例4单克隆抗体特性鉴定一、亚型鉴定用100mmpbs()稀释包被羊抗鼠igg(北京中杉金桥生物技术有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，过夜。倾空液体，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封闭液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，广东专注dMMR抗体检测试剂值得推荐，广东专注dMMR抗体检测试剂值得推荐，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。倾空液体用pbs-t清洗3次。用封闭液1：1000稀释hrp标记的羊抗鼠(κ,λ)抗体或1：2000稀释hrp标记的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗体，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。迈杰转化医学建立了符合质量体系规定的覆盖全平台的伴随诊断产品研发实验室、质检实验室，拥有GSP证书。广东专注dMMR抗体检测试剂值得推荐
5MSI在结直肠ai诊断及预后中的应用MSI在林奇综合征中筛查诊断中的应用由于如Amsterdam标准、Bethesda标准等鉴定标准对林奇综合征诊断缺乏稳定性和敏感性[9]，目前公认的**准确、可靠地诊断林奇综合征的方法是MMR基因测序。又因MMR基因测序的费用昂贵，因此在进行基因测序前先进行初步筛查。目前较为公认的林奇综合征相关的初步筛查检测包括聚合酶链反应（PCR）和免疫组化（IHC）。当样本确定为MSS时，患者不可能患林奇综合征；当样本确定为MSI-L时，绝大部分患者不可能患林奇综合征；当样本确定为MSI-H时，患者患有林奇综合征的可能性极高，需进一步进行林奇综合征的筛查诊断。聚合酶链反应（PCR）：PCR的结果判读本文不做讨论。IHC检测注意事项：（1）可能会出现MMR蛋白在liu细胞核着色不完整或着色极微弱（并伴随细胞质着色）现象，有文献指出该现象可能是MMR基因突变（如错义突变）或MMR蛋白特点（该现象常见于MSH6蛋白）而造成的，建议进行PCR检测。（2）大约有ai患者其IHC检测MLH1蛋白表达缺失。这种缺失同遗传性无关，是MLH1启动子双等位基因的异常甲基化而造成的，为避免误诊，需加做BRAFV600E突变检测。若检测结果为阳性，可排除Lynch综合征[10]。。江西作用dMMR抗体检测试剂创新服务迈杰转化医学利用数字PCR进行低丰度突变研究等；提供循环肿l瘤DNA检测，可检测EGFR、ERBB2等Biomarker。
还应重视对有血缘关系亲属的结直肠ai筛查。详尽的筛查建议见《中国结直肠liu筛查、早诊早治和综合预防共识意见》。4.炎症性肠病相关结直肠ai的筛查：炎症性肠病是结直肠ai发生的高危因素。其中溃疡性结肠炎ai变的主要危险因素包括全结肠病变及病程>10年，对此类患者应更重视结肠镜检查。根据溃疡性结肠炎ai变的不同危险度分级，决定全结肠镜筛查的时间间隔。溃疡性结肠炎患者全结肠镜筛查的主要目的是早期发现黏膜上皮内瘤变及相关病灶，因此需要进行多段多点活组织病理学检查以提高检出率。克罗恩病的ai变率接近溃疡性结肠炎，长期活动***程是ai变发生的高危因素，累及结直肠的克罗恩病患者筛查方案与溃疡性结肠炎相似。四、结直肠ai的化学预防结直肠ai的一级预防包括结直肠ai的化学预防和对结直肠腺瘤的处理。通过改善饮食等生活习惯，应用药物预防腺瘤的发生或切除后再发或ai变，以及预防炎症性肠病ai变，均属于广义的化学预防。对结直肠腺瘤的处理包括：一级预防即降低结直肠腺瘤的发生风险。具体的措施包括：(1)改善饮食结构，增加膳食纤维的摄取。(2)适当补充钙剂和维生素D。(3)对叶酸水平较低者，可适当补充叶酸。(4)戒烟。对于罹患结直肠ai高危人群年龄>。
不可因此误导后续的胚系突变检测方向。图2对错配修复蛋白免疫组织化学染色结果进行判读时，需注意：A：内对照细胞(淋巴细胞、平滑肌细胞及正常隐窝上皮细胞)核应为阳性(MSH2)；B：liu上皮巢内浸润的淋巴细胞核阳性，注意不要误判为liu细胞阳性(MLHI)；C：某些抗体在liu细胞核失表达时可H{现胞质非特异性着色(MSH6)，不应误判为阳性；D：少数MSI-Hliu可出现MSH6局灶性表达(MSH6)EnVision法中倍放大2．基于PCR的MSI检测：PCR检测MSI的原理是通过PCR方法扩增特定的微卫星序列，通过比较liu组织与正常组织微卫星序列长度的差异判断是否存在MSI现象(图3)。MSI国际研究合作组织推荐检测的五个位点中Bat26、Bat25为单核苷酸重复序列，D5S346、D2S123和D17S250为双核苷酸重复序列，也有研究推荐检测更多微卫星位点。确定MSI的标准为：>30％的位点不稳定为MSI-H，10％～30％为MSI-L，<10％为MSS。由于MSI-Lliu的MSI通常*发生在双核苷酸位点，为更好地区分MSI-H与MSI-Lliu，美国国立ai症研究院(NCI)2004年在修订Bethesda指南中推荐对*有双核苷酸位点不稳定的liu增加单核苷酸检测位点。近年来，已有很多包含更多单核苷酸检测位点的MSI检测商用试剂盒出现。覆盖多个主流IHC自动染色平台，适用范围广。
微卫星不稳定（microsatellite instability, MSI）
微卫星不稳定性是指与同一个体的正常组织细胞的DNA相比，liu细胞的基因组DNA中单个、两个、三个、四个或五个核苷酸组成的重复序列的长度发生了改变。liu组织表现出的微卫星不稳定性可按照所测标记物的不稳定程度分为高不稳定性（MSI-H）、低不稳定性（MSI-L）和微卫星稳定（MSS）。
错配修复缺陷（differentMismatchRepair,dMMR）DNA错配修复系统MMR（MismatchRepair）是由一系列高度保守的基因及其表达的产物酶构成，具有维持DNA复制的高保真度和基因组稳定性、降低自发突变的功能。DNA错配修复系统缺陷会造成微卫星不稳定情况。通常认为dMMR与MSI-H在生物学上具有一致性，而MSI-L和MSS则是MMR正常（proficientmismatchrepair，pMMR）的表型。 迈杰转化医学可以提供覆盖肺ai、肠ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多种实体瘤的上百项检测项目。上海定制dMMR抗体检测试剂来电咨询
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使得微卫星序列长度或碱基组成发生改变。MSI-H的患者为dMMR，MSI-L和MSS的患者为pMMR。目前推荐用于检测微卫星不稳定的5个常用位点分别为BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346和D17S250，2个位点不稳定则称为微卫星高度不稳定（MSI-H）；l个位点不稳定称为微卫星低度不稳定（MSI-L）；0个位点不稳定则称为微卫星稳定（MSS）。微卫星状态与结肠ai临床分期密切相关，在II期结直肠ai中，MSI-H/dMMR患者约占20%左右，在III期结直肠ai中约占12%，而在IV期中**少，约4%左右。1.微卫星状态在结肠ai中的预后作用从2000年Gryfe等发现Ⅰ~Ⅳ期的MSI-H结直肠ai患者对比MSS患者均具有***的生存优势开始，此后人们进行了一系列MS状态与结肠ai预后的相关研究，多数研究结果提示MSI对结肠ai的预后作用与临床分期密切相关。在II期结肠ai中，MSI-H/dMMR是预后良好的标志已被绝大多数研究所证实，基本达成共识；而对于III期结肠ai的预后价值尚存在争议；对于IV期结肠ai，由于MSI-H例数过少，因此相关结果不能说明其是否具有预后价值。MS状态对结肠ai的预后作用，不*与临床分期相关，还与**原发部位相关。N0147研究结果显示在III期结肠ai中，近端结肠（盲肠、升结肠、横结肠）。广东专注dMMR抗体检测试剂值得推荐
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