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细胞培养中，需要去除支原体的污染：支原体污染是细胞培养中 普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响：
01/ 争夺营养 – 阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失，耽误研究时间
07/ 实验结果的不可靠性，实验结果的重复性 降低
08/ 生物安全问题
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细胞培养中支原体污染的检测方法有多种，以下是一些常用的检测手段：
1. 显微镜检测：通过相差显微镜观察细胞，支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。
2. 荧光染色法：使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合，使支原体的DNA着色，然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。
3. 电镜检查：使用扫描电镜或透射电镜观察，这是一种简便快速的方法。
4. 聚合酶链反应（PCR）：使用特定的引物对支原体DNA进行扩增，是一种高灵敏度的检测方法。
5. 等温扩增法：基于LAMP技术，室温反应后观察颜色变化确认是否有支原体污染。
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细胞培养过程中如果发现支原体污染，可以采取以下一些方法尝试去除污染：
1. 抗*素治*：使用针对支原体有效的抗*素，如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果，可以加入高浓度抗*素进行冲击治*，例如庆大霉素 200ug/ml，四环素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理：支原体不耐热，可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意，高温也可能对细胞造成伤害，因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂：市场上有专门的支原体清除剂，按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基：如Procell支原体清*培养基，这类产品含有清*支原体的特殊成分，可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法：一些实验室采用过滤的方法，使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂，以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代：在一些情况下，通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
在科研中，支原体检测是确保细胞培养纯净性的重要环节。以下是一些在科研中常见的支原体检测方法：
1. 支原体培养法：这是一种传统的检测方法，通过将细胞培养物接种到特定的培养基中，观察是否有支原体生长。这是直接的检测方法，但耗时较长，通常需要数周时间。
2. DNA染色法：使用荧光染料（如Hoechst或DAPI）染色细胞核，然后通过荧光显微镜观察。这种方法操作简便，可以快速得到结果，但特异性不高，可能会有假阳性。
3. 聚合酶链反应（PCR）法：这是一种分子生物学技术，通过设计特异性的引物，扩增支原体DNA，从而检测支原体的存在。PCR法具有高灵敏度和特异性，已成为日常细胞培养维护的可靠方法。
4. 核酸扩增技术（NAT）：NAT技术通过扩增并检测特定的支原体基因组保守序列来进行支原体污染检测，具有快速、简便的特点。
细胞培养中支原体污染的后果？
支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养，这取决于多种因素，包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法：
1. 直接丢弃：对于非重要的细胞，如果培养中的细胞、WCB的细胞等，可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。
2. 使用支原体清除剂：支原体清除剂处理细胞，作用浓度为25μg/ml，两周可以清*支原体。
3. 使用支原体清*培养基：每2~3天更换一次新鲜培养液，并用无菌的PBS洗涤细胞，处理15天后进行支原体检测，以确定支原体是否被完全去除。
4. 支原体去除试剂：这是一种混合制剂，可以通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果，且对细胞无伤害
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需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类：
1. 生物医药企业：生产涉及细胞培养的生物制品的公司，包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司：进行细胞产品的研发和生产的企业，需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构：从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构，需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位：使用细胞技术进行的医院或诊所，需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库：保存和供应细胞株的细胞库，需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司：提供生物技术服务的公司，如细胞培养、基因编辑等，需要确保服务过程中细胞的质量。
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