|
方法
|
灵敏度
|
优势
|
劣势
|
|
培养法
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 便宜
ü 金标准
|
ü 费劳力
ü 耗时长
ü 需要特定的培养基
ü 特定支原体种类需要特定的培养基
|
|
DNA染色
(DAPI or Hoescht)
|
☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 可能难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 可能假阳性可能性
|
|
间接染色
|
☆☆☆
|
ü 迅速
ü 便宜
ü 易检测
|
ü 费时
ü 需要细胞系指示
|
|
ELISA
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 客观，易判读结果
ü 可以鉴别支原体种属
|
ü 受抗体限制
ü 价格高
|
|
免疫染色
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 可检测支原体种属
ü 价格略高
|
ü 可检测的支原体种属有限
|
|
放射自显影
|
☆☆
|
ü 迅速
|
ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 费劳力
|
|
生物发光
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
|
|
PCR
|
☆☆☆
|
ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特异性
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
|
|
Real-Time PCR
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特异性
ü 结果可靠
ü 高通量
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
|
|
LAMP
|
☆☆
|
ü 便捷
ü 无需DNA提取
ü *需10min左右的实验操作时间
ü 具有特异性
ü 高通量
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
细胞培养支原体污染怎么去除？北京细胞支原体检测说明书
|
细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起：
1. 扩增产物污染：PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理，极微量的污染就可能导致假阳性结果。
2. 引物设计不当：引物设计不够特异性，可能会与非目标序列发生反应，导致非特异性扩增。
3. 试剂质量问题：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳，可能引起非特异性扩增或假阳性结果。
4. 操作技术问题：实验操作不规范，如混合样本、标签错误或样本标识不清等，可能导致假阳性结果。
5. PCR反应条件设置不当：不恰当的PCR反应条件，如温度和时间选择不当，可能导致非特异性扩增。
6. DNA污染：PCR环境中的DNA污染会干扰结果，导致假阳性
温州支原体预防多少钱细胞培养中支原体为什么难以彻底消灭？
支原体预防的策略主要包括以下几个方面：
1. 控制污染源：通过定期检测和去除细胞培养中的支原体污染，确保细胞培养体系内无支原体存在，从而获得准确有效的实验数据。
2. 改善无菌操作技术：通过提高实验人员的操作技术和意识，避免在细胞培养过程中引入支原体污染。
3.使用无菌设备和耗材：使用无菌的细胞培养设备和耗材，如无菌培养基、血清等，减少支原体污染的风险。
4. 定期消毒和清洁：对实验室环境进行定期的消毒和清洁，包括工作台、培养箱等，以减少支原体的潜在污染。
5. 使用预防性试剂：使用专门针对支原体的预防性试剂，如加入细胞培养基中的预防剂、超净台喷雾、水浴锅预防和细胞培养箱水盘预防等，以预防支原体污染。
一步法支原体检测试剂盒的防污染版本通常采用等温扩增技术，如LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）原理，通过支原体特异性引物在恒温条件下对样本进行检测，终通过颜色变化确定样品中是否含有支原体污染。这种方法的优势在于：
1. 快速检测：可以在较短的时间内完成检测，通常在60分钟以内。
2. 高灵敏度和特异性：等温扩增技术可以检测到非常低浓度的支原体DNA。
3. 操作简便：不需要复杂的设备，如PCR仪或电泳设备，只需水浴锅即可完成扩增反应。
4. 减少污染风险：由于无需开盖电泳，可以减少因气溶胶造成的交叉污染。
此外，试剂盒还包含UNG（Uracil-N-Glycosylase）酶，用于防止PCR过程中的污染，UNG酶可以消化反应液中可能存在的尿嘧啶，从而减少因污染导致的假阳性结果。
细胞培养过程中支原体污染怎么预防？
细胞培养中支原体难以彻底消灭的原因主要包括以下几点：
1. 无细胞壁结构：支原体是没有细胞壁的微生物，这使得许多作用于细胞壁的抗*素对支原体无效。
2. 微小体积：支原体体积小，能够穿过常规的除菌滤膜，例如0.20微米甚至0.10微米的滤膜。
3. 隐匿性：支原体污染初期很难被察觉，它们在普通光学显微镜下几乎不可见，因此细胞被支原体污染后，前期很难被发现。
4. 传播途径多样：支原体可以通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径迅速传播。
5. 污染源 ：支原体污染源包括细胞间的交叉污染、操作人员的口腔、皮肤，以及细胞培养用的组分如血清、培养液等。
6. 环境因素：实验室环境、试验台、超净台、培养箱等可能被支原体污染，引起细胞的污染。
7. 抗*素耐药性：支原体可能对某些抗*素产生耐药性，使得治*效果变差。
8. 检测和清理方法的局限性：一些传统的支原体检测和清理方法可能不够灵敏或有效，导致难以彻底清理支原体
为什么要去除支原体？北京细胞支原体检测说明书
支原体检测的应用场景？北京细胞支原体检测说明书
支原体检测实验设计和实验方法需要考虑以下几个关键点：
1. 选择合适的检测方法：根据实验室条件和需求，选择适合的支原体检测方法，如培养法、PCR法、ELISA法、DNA荧光染色法等。
2. 样本的采集与处理：确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范，避免交叉污染。
3. 实验操作的标准化：制定详细的实验操作流程，包括样本接种、培养条件、观察时间点等，以保证实验的可重复性和准确性。
4. 使用适当的培养基：根据支原体的特性选择合适的培养基，如支原体肉汤培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等，并确保培养基的灵敏度和特异性。
5. 设置对照组：实验中应包括阳性对照和阴性对照，以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。
6. 结果的判定：根据实验方法的不同，设定明确的标准来判定结果，如培养法中观察“荷包蛋”状菌落，PCR法中通过扩增条带的有无来判断。
7. 避免抑制物质的影响：在实验设计中考虑可能存在的抑制物质，并采取适当措施中和或抵消它们的作用。
北京细胞支原体检测说明书
文章来源地址: http://yyby.chanpin818.com/swzp/qtswzp/deta_21908763.html
免责声明：
本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。
[VIP第1年] 指数:3
